操作步骤:1. 取200μl细菌菌液(最多不超过1×109cells)于无酶1.5ml离心管中。2. 10000×g离心1min或3000×g离心5min收集细菌沉淀。3. 加入200μl无菌PBS将细菌重悬。注意:为尽可能减少LB等细菌培养基对提取过程中的影响,可重复步骤2-3一次。4. 加入30μlLysozyme Solution至溶液中,充分涡旋混匀15-20s后37℃孵育15-30min。5. (可选)加入5μl RNaseASolution(20mg/ml,自备)至消化液中,颠倒混匀,室温或37℃放置5-10min。6. 将所得溶液加入200μl Buffer BB并充分混匀,加入20μl ProteinaseK Solution后立即混匀,彻底混匀后置于70℃水浴中孵育10min。7. 将溶液从水浴中取出,并加入100μl异丙醇充分混匀。8. 于13000×g离心5min,离心结束后取上清溶液加入核酸吸附柱(提前套在2ml收集管中)。9. 以8000×g离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。10. 向吸附柱中加入500μl Buffer IRB,8000×g离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。11. 向吸附柱中加入500μl Buffer WB(已加入无水乙醇),8000×g离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。12. 重复操作步骤11一次。13. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中,最大转速 (~13,400×g)离心2min以除尽Buffer WB。将吸附柱套入新的1.5ml无酶离心管中并置于室温放置5-10min彻底晾干乙醇。注意:Buffer WB中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。14. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50-100μl BufferEB,室温静置2min后,最大转速(~13,400×g)离心2min收集核酸溶液。丢弃柱子,盖上EP管盖子置于-20℃保存。注意:洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。为了提高DNA的回收量,可将BufferEB加热(约60℃)并洗脱两次,可增加约15-20%得率。
从10-250ul血液及相关体液等样品中直接提取总DNA产品介绍 本试剂盒适用于哺乳动物血液核酸提取,不含苯酚等有毒化学试剂组分,采用独特的缓冲液配方 Buffer IRB 最大限度去除血液抑制剂的影响,同时应用先进的硅胶膜吸附技术,操作简单、快速。得到的 DNA 比传统试剂盒纯度更高,可直接用于酶切、转化、测序及 PCR 等分子生物学实验。 存储条件 本产品除 Proteinase K 溶液和 RNase 溶液外,可在室温(15~25℃)保存 12 个月。低温下 Buffer BL 或 Buffer IRB 可能会有沉淀形成,使用时需 55℃水浴让沉淀完全溶解。Proteinase K 溶液和 RNase A 溶液冰袋运输,收到产品后请分装保存于-20℃。 需要额外准备的材料 □ 无水乙醇(96%-100%) □ 无菌 1.5/2ml 离心管 开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 ● Buffer BL 和 Buffer IRB 是如有混浊现象,可在 55℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。 ● 基因组提取所有步骤都在室温(15-25°C)下进行。 开始前试剂准备 □ 按瓶子标签所示,Buffer BL 及 Buffer IRB 中加入适量的无水乙醇稀释,于室温密封保存。 DNA 浓度及纯度检测 回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测纯度与浓度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。 OD260/OD280 比值应为 1.7-2.0,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用 ddH2O,比值会略低,因 为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 应用领域 该方案适合于从约 10μl-1ml 人类的抗凝血液、血清、血浆、尿液、或其它体液样品中直接提取总 DNA。 该方案直接对样品进行裂解消化,获得的 DNA 包括了基因组 DNA(如淋巴细胞、线粒体 DNA、游离的 DNA(>100bp)、以及病毒 DNA(如乙肝)等;
从10-250ul血液及相关体液等样品中直接提取总DNA产品介绍 本试剂盒适用于哺乳动物血液核酸提取,不含苯酚等有毒化学试剂组分,采用独特的缓冲液配方 Buffer IRB 最大限度去除血液抑制剂的影响,同时应用先进的硅胶膜吸附技术,操作简单、快速。得到的 DNA 比传统试剂盒纯度更高,可直接用于酶切、转化、测序及 PCR 等分子生物学实验。 存储条件 本产品除 Proteinase K 溶液和 RNase 溶液外,可在室温(15~25℃)保存 12 个月。低温下 Buffer BL 或 Buffer IRB 可能会有沉淀形成,使用时需 55℃水浴让沉淀完全溶解。Proteinase K 溶液和 RNase A 溶液冰袋运输,收到产品后请分装保存于-20℃。 需要额外准备的材料 □ 无水乙醇(96%-100%) □ 无菌 1.5/2ml 离心管 开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 ● Buffer BL 和 Buffer IRB 是如有混浊现象,可在 55℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。 ● 基因组提取所有步骤都在室温(15-25°C)下进行。 开始前试剂准备 □ 按瓶子标签所示,Buffer BL 及 Buffer IRB 中加入适量的无水乙醇稀释,于室温密封保存。 DNA 浓度及纯度检测 回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测纯度与浓度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。 OD260/OD280 比值应为 1.7-2.0,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用 ddH2O,比值会略低,因 为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 应用领域 该方案适合于从约 10μl-1ml 人类的抗凝血液、血清、血浆、尿液、或其它体液样品中直接提取总 DNA。 该方案直接对样品进行裂解消化,获得的 DNA 包括了基因组 DNA(如淋巴细胞、线粒体 DNA、游离的 DNA(>100bp)、以及病毒 DNA(如乙肝)等;