储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介及特性本试剂盒采用独特的缓冲液体系和离心吸附柱,既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp-20 kb大小的DNA片段,又能用于直接纯化PCR产物,满足多种实验需要。整个纯化过程可在15分钟完成、不需进行苯酚萃取及酒精沉淀、纯化的DNA无盐类或大分子的污染。如果回收前DNA量为1-5ug,建议选用超薄DNA产物纯化试剂盒GF203或超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒DF208,推荐洗脱液体积20-50ul。a.使用相同的溶液,可进行三种不同的应用(PCR 产物纯化、DNA 产物纯化、胶体回收)。b.每一离心管柱可处理达 150ul 的 DNA 溶液或 PCR 反应产物,DNA 回收率可达 80%~95%。c.可用于以 TAE 或 TBE 缓冲液配制的琼脂糖凝胶的 DNA 回收,DNA 回收率可达 60~90%。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定:如回收前DNA只有1-5μg左右(推荐选用GF203或GF208超薄型试剂盒),加20-50μl洗脱液;如回收前有5-15μg左右DNA,加30-100μl洗脱缓冲液;如回收前有15-30μg左右DNA,加50-300μl洗脱缓冲液。5.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。6.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。一、从 PCR 反应液或酶切反应液中回收 DNA 1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。 2.加入 3 倍体积的溶液 PC 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。 3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.加入 700ul 的漂洗液至吸附柱中,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 5.重复操作步骤 4。 6.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验 7.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液 TB,室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。 二、从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段 1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。 2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PC,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。 注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。 3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.可选步骤:向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PC,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。 5.向吸附柱加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 6.重复操作步骤 5。 7.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验。 8.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱液 TB,静置 2 分钟,室温放置 2 min,12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp-30kb大小的片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。如果回收前 DNA 量为 1-5ug,建议选用 DF208 超薄琼脂糖凝胶回收 kit,推荐洗脱液体积 20-50ul。产品特点快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度的目的DNA。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。5.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PN,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎 块)。 注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。 3.将吸附柱 CB2 放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.可选步骤:向吸附柱 CB2 加入 400ul 的溶液 PN,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。 5.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。 6.重复操作步骤 5。 7.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。 8.将吸附柱 CB2 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 30-100ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp-30kb大小的片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。如果回收前 DNA 量为 1-5ug,建议选用 DF208 超薄琼脂糖凝胶回收 kit,推荐洗脱液体积 20-50ul。产品特点快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度的目的DNA。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。5.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PN,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎 块)。 注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。 3.将吸附柱 CB2 放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.可选步骤:向吸附柱 CB2 加入 400ul 的溶液 PN,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。 5.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。 6.重复操作步骤 5。 7.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。 8.将吸附柱 CB2 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 30-100ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。 产品简介 本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-20 kb DNA片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。 产品特点 快速:整个操作过程只需十几分钟,节省时间。 多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。 高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度目的DNA。 注意事项 1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择胶回收试剂盒。 2.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。 3.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。 操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签;所有离心步骤均为使用台式离 心机在室温下离心。 1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。 2.加入 3 倍体积的溶液 PB 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。 3.将吸附柱 CB1 放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g ) 离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.向吸附柱 CB1 中加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 5.重复操作步骤 4。 6.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。 7.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量 50-300ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 50 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。 产品简介 本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-20 kb DNA片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。 如果回收前DNA量为1-5ug,建议选用GF203超薄DNA产物纯化kit,推荐洗脱液体积20-50ul。 产品特点 快速:整个操作过程只需十几分钟,节省时间。 多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。 高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度目的DNA。 注意事项 1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择胶回收试剂盒。 2.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。 3.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。 操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签;所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。 2.加入 3 倍体积的溶液 PB 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。 3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。 5.重复操作步骤 4。 6.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。 7.将吸附柱CB2置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加30-100洗脱缓冲液TB,室温放置2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-10 kb DNA片段,回收率可达80%以上,可用最少20ul的洗脱液进行洗脱,每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为5 μg,特别适用于较少样品量的回收。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。产品特点快速:整个操作过程只需十几分钟,节省时间。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度目的DNA。注意事项1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择胶回收试剂盒。2.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。3.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签;所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。2.加入 3 倍体积的溶液 PB 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB3 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.向吸附柱 CB3 加入 700ul 的漂洗液 PW,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB3 放回收集管中。 5.重复操作步骤 4。 6.将吸附柱 CB3 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。 7.将吸附柱 CB3 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 20-50ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积最低不应小于 20 μl,体积过少会影响回收的效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防止 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,再次离心管。
储存条件 本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以平衡溶液温度)。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。产品简介 本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的去内毒素溶液ER和过滤柱CS1,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1个小时,方便快捷。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。4.去内毒素溶液 ER 在多次开盖使用后,可能会有细微的颜色变化,不影响最终质粒提取效率和纯度。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其它用途1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌体量以能够充分裂解为佳,过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。 2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1 (请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀,然后室温放置10 min左右,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。 5.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心2min,小心地将过滤离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体,说明步骤4的上清中杂质过多,可以延长离心的时间;如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量地吸取上清)。6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。7.向吸附柱CP2加入750 ml 去内毒素溶液ER(已经加入异丙醇),静置2分钟使管柱膜平衡,室温12,000rpm (~13,400×g)离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。8.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。注意:加入漂洗液PW后,如果室温静置2-5 min,有助于更好地去除杂质。 9.重复操作步骤8.10.将吸附柱CP2重新放回收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 11.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA,可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。收集的菌体量以能够充分裂解为佳,菌体过多裂解不充分会降低质粒的提取效率。 2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。 注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。 注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5min,以免质粒受到破坏。如果菌液没有变清亮,可能是由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。 注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。 5.将上一步收集的上清液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中,其容量为750-800ul),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。 6.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。 7.重复操作步骤6。 8.吸附柱CP2放入收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 9.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。 产品简介 本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。由于增加了过滤柱,与普通的提取方法相比,本试剂盒可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。 2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。 3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。 4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g)。 5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。 2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。 注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。 注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。 注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。 5.12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min,小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱CP1中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体说明步骤4吸取的上清中杂质过多,可以延长离心的时间; 如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量的吸取上清)。 6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 7.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 8.重复操作步骤7。 9.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 10.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。 低拷贝或大质粒( >10kb)提取 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同。
储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。 产品简介 本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1-5ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。 2.使用前请先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄 清。 3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。 4.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm(~13,400×g )。 5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。 2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。 注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。 注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时 菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体 过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时将出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心10 min。 注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上 清。 5.将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP1中 (吸附柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 6.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 7.重复操作步骤6。 8.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去 除。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 9.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。 低拷贝或大质粒( >10kb)提取 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同
【操作方法】1. 对于贴壁细胞(以下均以6孔板为例,其它培养皿或培养板请根据相应面积换算):a.将细胞培养于培养皿或培养板内,通常在铺板后1-2天内长到70-90%。 b. 在转染前1-2小时,吸去细胞培养液,更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。c. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl,若有多种质粒请混匀),以质量体积比1:3加入转染试剂6~12μl(如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl)。d.混匀后,室温孵育3-5分钟。e. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM(若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640,具体根据转染细胞使用的培养基),充分混匀后静置10-15分钟。 f.后均匀滴加到整个6孔板内(加入前吸出原培养板中500μl培养基),并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 g. 在转染后4-6小时左右换液,更换为2ml新鲜的完全培养液,继续培养。h.通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。2. 对于悬浮细胞: a. 离心收集悬浮细胞,用PBS洗涤一次。 b. 按照上面的步骤c)、d)、e)制备DNA-转染试剂-optiMEM混合物。c. 每106个细胞的沉淀,用500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物重新悬浮,室温放置15-20分钟。 d. 在一个6孔板孔内加入1.5ml完全培养液,然后加入来自上一步的细胞-500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物,混匀。e. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同,在4-6小时后离心收集细胞,用PBS洗一次,然后用2毫升完全培养 液重新悬浮细胞,继续培养。 g. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。
功能与使用方法与life品牌的Trizol LS相似 【保存条件】2-8℃长期保存【操作方法】I. 样本处理1. 组织样本处理:用匀浆器或其他类似设备匀化组织样本机械破坏装置,每 500μL 最多使用 50 mg 组织NewZOL LS。 对于 DNA 含量高的组织(例如脾脏),建议使用 25 mg 组织/ 500μL 试剂。 2. 贴壁细胞样本处理:除去细胞培养基,通过向培养皿(直径 3.5 cm,10 cm2)中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通过反复吸移来确保完全裂解。(根据培养皿面积而不是细胞数计算试剂量。试剂量不足将导致分离的 RNA 受到 DNA 污染。残留的匀浆可以在-20 至-80°C 下保存至少一年,以备后用。) 3. 悬浮细胞样本处理:沉淀细胞,并通过添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106个细胞至少加入 500μLNewZOL LS,移液器吹打数次裂解细胞。(添加 NewZOL LS 之前请勿洗涤细胞,细胞洗涤可能会导致 RNA降解。) 4. 液体样本处理:每 200μL 液体样品中加入 500μL NewZOL LS 进行均质化和裂解。对于小于 200μL 的样品体积,请添加 500μLNewZOL LS 并加水至最终体积为 700μL。 5. 富含脂质样本处理:如上所述均质化富含脂质的样品。将样品以 12,000×g 离心 5 分钟。 离心后,样品顶部会出现一层脂肪。用移液器吸头尖端刺穿上层,然后将上清液转移到新管中。 II. RNA 提取1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 无 RNase 的水至裂解液中。剧烈摇动样品 15 秒钟。在室温下孵育 5 分钟。(对于包含 50 mg 组织/ 500μL NewZOL LS 的样品,建议在室温下孵育 15 分钟。) 2. 在室温下以12,000×g离心样品15分钟。含有DNA,蛋白质和多糖的半固体沉淀物形成在试管底部。RNA仍溶解在上清液中。 3. 将 500μL 上清液转移至新管中。 勿吸太干净防止污染,在 DNA /蛋白质沉淀上方保留一小部分上清液。(含有 DNA,蛋白质和多糖的沉淀物占匀浆-水混合物总量的约 10%。)4. 加入等体积异丙醇,上下颠倒混匀以沉淀 RNA,在室温下孵育样品 10 分钟。5. 将样品以 12,000×g 离心 10 分钟,除去并丢弃上清液。通常,在管的底部以白色沉淀的形式获得 RNA。对于脾脏样品,RNA 在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后,膜变得更可见。 6. 加入 500μL 75% 乙醇(无 RNase 水配制)洗涤,轻弹管底使沉淀悬浮,上下颠倒混匀。对于较大的试管,按比例添加 75% 乙醇溶液。 7. 将沉淀以 8,000×g 的速度离心 3 分钟。移液去除沉淀中的乙醇,重复乙醇洗涤步骤一次。静置 5-10 分钟待乙醇挥发,无需过份干燥成固体,干燥成固体的 RNA 沉淀不易溶解 8. 将 RNA 沉淀溶于无 RNase 的水中,在室温下涡旋 3 分钟,以实现有效溶解。将得到的 RNA 进行检测或-65℃长期保存(若需更长时间保存请添加适量 RNA Chill(ES-8520))。 【注意事项】1. RNA 酶污染注意事项:a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌,吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管 b. 佩戴手套及口罩及护目镜:皮肤上常含有细菌和霉菌,可污染 RNA 制备,且同时是 RNA 酶来源,同时 New ZOL LS 对皮肤有一定毒性,建议佩戴手套及口罩及护目镜。 c. 尽量于通风橱内提取:避免吸入提取过程中有毒物质。2. 安全性问题:a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性,可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适,应立即就医
【保存条件】常温运输,2-8°C保存12个月【产品特点】l快速高效:5~10 min快速完成封闭;只结合封闭转印膜而不结合蛋白,因此不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,与传统的脱脂奶粉和BSA封闭相比信噪比更高;l性能可靠:无蛋白配方,与抗体无交叉反应;l应用范围广:无磷酸化蛋白,无生物素,尤其适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统;l增强抗体效果:使用本封闭液后,所需的最适抗体浓度低于常规使用浓度,可大大节省抗体使用量。【概述】本品专为快速高效封闭Western Blot转印膜而设计,采用无蛋白配方,避免抗体与封闭剂的非特异结合,可最大程度地降低背景。同时,本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素,对磷酸化特异抗体及生物素检测也不会产生干扰。本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合,因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,大大提高了抗体检测灵敏度。实验表明本封闭剂对许多抗体都有不同程度的信号增强作用。然而这种信号增强作用因抗体而异,对某一特定抗体,并不一定具有确定的信号增强作用。【使用建议】1.完成转膜后,将转印膜放入到杂交孵育盒中,根据膜的大小适量体积的快速封闭液,需完全浸没覆盖膜,对于7.5×8cm的膜推荐使用量5-10ml;2.置于摇床轻轻摇动,室温封闭约10min;注意:使用本品通常封闭5~15min均可;经多种抗体的测试封闭10min的效果显著优于常规的BSA封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体,可以尝试将封闭时间延长为30~60 min。如有特殊需要,也可4°C封闭过夜。3.封闭后的膜即可用于一抗孵育等后续实验。【注意事项】1.注意: 没有任何一种封闭剂能适合所有抗原和抗体检测系统。如出现本试剂不适合的抗体,请替换使用其它种类的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等;2.本品仅用于科研用途,不得用于临床或诊断相关研究;3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品描述一步定向克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的多片段DNA定向克隆产品,可以不依赖于连接酶,不受载体和目的片段的酶切位点限制,直接用同源重组的方法将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点,完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单,PCR产物一步定向克隆,目的片段与载体无缝连接,反应时间短至10分钟,阳性率达到95%以上,让您轻松完成实验。保存条件收到后请立即低速离心保存在-20℃;此Kit可在-20℃长期保存,避免反复冻融。
产品描述一步定向克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的多片段DNA定向克隆产品,可以不依赖于连接酶,不受载体和目的片段的酶切位点限制,直接用同源重组的方法将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点,完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单,PCR产物一步定向克隆,目的片段与载体无缝连接,反应时间短至10分钟,阳性率达到95%以上,让您轻松完成实验。保存条件收到后请立即低速离心保存在-20℃;此Kit可在-20℃长期保存,避免反复冻融。
产品描述第一链cDNA合成预混液是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(NovoScript® II Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。制品中含有去基因组成分gDNA Purge,以RNA为模板进行cDNA第一链合成时,可以同步去除基因组DNA污染,反应结束后,75℃加热5分钟,就可以失活反转录酶,RNA酶抑制剂。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。产品特点1)本制品采用耐高温逆转录酶,大幅提高热稳定性和cDNA合成效率;2)本制品中添加的NovoScript® II Reverse Transcriptase无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量;3)本制品中Random N6和Oligo(dT)18引物比例经过优化,可均匀合成样品中的cDNA;4)本制品中含有去基因组成分,逆转录时可同步去除基因组DNA污染。保存条件-20℃。注意事项1)用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。2)确保所用试剂中无RNA酶污染。3)试剂盒要严格密封保存。在逆转录过程中,所有管子要确保扣严。4)纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。5)为保证逆转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。6)当模板含量较低或后续PCR扩增片段过长时可以适当延长逆转录时间。7)2×NovoScript® Plus 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix、gDNA Purge及2×NovoScript® Plus No RT Control含有甘油,使用前请充分混匀后并短暂离心收集至管底再进行使用。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,并结合精心优化的反应Buffer,具有更高的扩增灵敏度,反应特异性和扩增效率,能够在更宽广的范围内进行准确定量。产品特点高灵敏度:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高的扩增灵敏度和扩增效率。高特异性:采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,无需热启动即可进行PCR反应,大大提高PCR扩增的特异性。快捷:PCR反应所必需试剂集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。保存条件-20℃避光储存。如需在一段时间内经常取用,可在2~8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。质量控制纯度检测:所有组分经检测均无核酸内切酶残留、核酸外切酶残留、核酸残留。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。引物设计:一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。