0.5M EDTA Solution, pH8.0 (Rnase/DNase-free)【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 乙二胺四乙酸(EDTA)是一种能与 Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二价金属离子结合的螯合剂。由于多数核酸酶类和有些蛋白酶类的作用需要 Mg2+,故常用做核酸酶、蛋白酶的抑制剂;也可用于去除重金属离子对酶的抑制作用。0.5M EDTA 溶液 pH8.0 是用 0.5M EDTA配制,用 NaOH 调节 pH 值至 8.0。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
0.5M EDTA溶液(pH8.0)使用说明书【包装规格】产品编号产品名称包装ES-80790.5M EDTA Solution, pH8.0100ml/500ml 使用说明书1份【保存条件】室温保存,有效期1年【概述】乙二胺四乙酸(EDTA)是一种能与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二价金属离子结合的螯合剂。由于多数核酸酶类和有些蛋白酶类的作用需要Mg2+,故常用做核酸酶、蛋白酶的抑制剂;也可用于去除重金属离子对酶的抑制作用。0.5M EDTA溶液用NaOH调节pH值至8.0。【注意事项】1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2M Tris-HCl Buffer,pH8.0【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 缓冲液用途广泛,常见于各种分子生物学实验或相关试剂配制。该产品在 25℃时 pH 为 8.0。 【注意事项】1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 温度变化对 Tris-HCl 缓冲液影响较大,温度每升高 1℃,pH 值降低约 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH7.6【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 缓冲液用途广泛,常见于各种分子生物学实验或相关试剂配制。该产品在 25℃时 pH 为 7.6。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 温度变化对 Tris-HCl 缓冲液影响较大,温度每升高 1℃,pH 值降低约 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH7.5【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 缓冲液用途广泛,常见于各种分子生物学实验或相关试剂配制。该产品在 25℃时 pH 为 7.5。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 温度变化对 Tris-HCl 缓冲液影响较大,温度每升高 1℃,pH 值降低约 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH7.4【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 缓冲液用途广泛,常见于各种分子生物学实验或相关试剂配制。该产品在 25℃时 pH 为 7.4。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。3. 温度变化对 Tris-HCl 缓冲液影响较大,温度每升高 1℃,pH 值降低约 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH6.8【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 缓冲液用途广泛,常见于各种分子生物学实验或相关试剂配制。该产品在 25℃时 pH 为 6.8。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 温度变化对 Tris-HCl 缓冲液影响较大,温度每升高 1℃,pH 值降低约 0.03,反之同理。
1M Tris-HCl Buffer,pH7.5【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】Tris-HCl 缓冲液用途广泛,常见于各种分子生物学实验或相关试剂配制。该产品在 25℃时 pH 为 7.5。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 温度变化对 Tris-HCl 缓冲液影响较大,温度每升高 1℃,pH 值降低约 0.03,反之同理。
0.5M Tris-HCl Buffer,pH6.8 【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 缓冲液用途广泛,常见于各种分子生物学实验或相关试剂配制。该产品在 25℃时 pH 为 6.8。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 温度变化对 Tris-HCl 缓冲液影响较大,温度每升高 1℃,pH 值降低约 0.03,反之同理。
D-Hanks Balanced Salt Solution,HBSS (- Ca2+,Mg2+)(- Phenol red)【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Hank's 液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS),主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。D-Hank's 与 Hank's 的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子,因此 D-Hank's 可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起 pH 指示作用。 该 HBSS 缓冲液为即用型,经过滤除菌,可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤等常规用途,使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。 【注意事项】 1. HBSS 溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
D-Hanks Balanced Salt Solution,HBSS (-Ca2+,Mg2+)(+ Phenol red)【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Hank's 液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS),主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。D-Hank's 与 Hank's 的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子,因此 D-Hank's 可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起 pH 指示作用。该 HBSS 缓冲液为即用型,经过滤除菌,可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤等常规用途,使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。 【注意事项】 1. HBSS 溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Hanks Balanced Salt Solution,HBSS (+ Ca2+,Mg2+)(+ Phenol red) 【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 Hank's 液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS),主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。 D-Hank's 与 Hank's 的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子,因此 D-Hank's 可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起 pH 指示作用。 该 HBSS 缓冲液为即用型,经过滤除菌,可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤等常规用途,使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。 【注意事项】 1. HBSS 溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
10% SDS Solution 【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 SDS 即 Sodium dodecyl sulfate,中文名为十二烷基硫酸钠。常用生化试剂,用途广泛,可以用于 SDS-PAGE、细菌碱裂解等。10% SDS 溶液为 100ml 溶液中含有 10g SDS,该溶液用超纯水配制,经 022μm 滤膜过滤处理。 【注意事项】 1. 环境温度较低时,10% SDS 溶液会产生大量白色沉淀,可通过 37℃水浴促溶。 2. 本产品对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
30%丙烯酰胺溶液 (29:1)使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-817430% Acr-Bis Solution (29:1)100ml/500ml使用说明书 1份 【保存条件】 4℃避光保存,有效期1年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (29:1) 即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例为29:1。 30% Acr-Bis Solution (29:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE胶),包括SDS-PAGE胶等,可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,简称Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,简称Bis)在催化剂的作用下,通过自由基引发聚合反应,形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关,交联度由Acr与Bis的相对比例决定,调节单体丙烯酰胺与交联剂(Bis)的浓度比例,可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中Bis的浓度越低,凝胶的孔径越大,适用于分离较大的分子;Bis的浓度越高,网孔越小,分辨率越高,越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Hygromycin B solution 50mg/ml 10ml【保存条件】4℃保存,一年有效【概述】潮霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素,可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌,真菌和高级真核生物。潮霉素 B最初是作为抗蠕虫药开发的,在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。【操作方法】1. 常用筛选浓度注意:潮霉素 B 用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为 50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞 50-500μg/mL;细菌/植物细胞 20-200μg/mL;真菌 300-1000μg/mL。2. 杀灭曲线的建立注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择 5 个浓度。1)第一天:未转化的细胞按照 20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2 培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定 50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例将母液稀释到 5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。3)第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。4)接下来每 3-4 天更换新的含药物培养基。5)按照固定的周期(如每 2 天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是 7-10 天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。3. 稳定转染细胞的筛选1)转染 48h 后,用含有适当浓度的潮霉素 B 筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过 25%。2)每隔 3-4 天更换含有药物的筛选培养液。3)筛选 7 天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。4)挑取并转移 5-10 个抗性克隆于 35mm 细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养 7 天。5)之后更换正常培养基培养即可。【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。
ECL Western Blotting Substrate 【保存条件】 4℃避光保存 12 月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物 系统,SuperStar ECL 超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂(具有极高灵 敏度和高信噪比);可在日光灯下进行发光操作;发光迅速,荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000), 极其节省抗体。 【特点】 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或 PVDF 膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的 4 小时时间内提供稳定的信号持续时间,在最佳条 件下可产生长达 24 小时的光输出 稳定的试剂 - 8 小时工作溶液稳定性; 在 4℃下 1 年的试剂盒稳定性 更经济的抗体用量: 0.2 至 1.0μg/ mL 一抗(从 1 mg / mL 原液中 1:1000 至 1:5000 稀释) 10 至 50 ng / mL 二级抗体(从 1 mg / mL 原液中 1:20,000 至 1:100,000 稀释) 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链 亲和素-生物素-HRP 夹法。2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取 A:B=1:1 混合(如需要 1ml 发光液则取 500ul ECL A 液和 500ul ECL B 液混合),放入干净容器中混合。建议立即使用 工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液 (0.125ml 发光工作液/cm2 膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育 2 分钟,准备立即压片 曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促 反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。 为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开 X 光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将 Western Blot 膜贴在 保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹 Western Blot 膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余 的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 Western Blot 膜的保鲜膜固定在暗 盒内,蛋白带面向上。 6. 暗房内压 X 光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1~5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移 到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带 模糊。3. 发光工作液孵育约 2 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋 白条带 发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发 光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光,因而弱带可曝光 1-10 小 时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发光和 曝光。4. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000~1:4000, 二抗 1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带 的位置和大小。7. NaN3能抑制 HRP 活性,回收第二抗体应避免使用 NaN3,如必需使用勿超过 0.01%。
1×PBS缓冲液(无菌)使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8006 1×PBS buffer(pH7.2-7.4) (Sterile,without Ca2+,Mg2+) 500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存,有效期1年 【概述】 PBS(phosphate buffered solution)即磷酸盐缓冲液,能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力,是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等,pH为7.2-7.4,与人体血液等渗,主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠. 本产品为1×工作液,经过除菌处理,可直接使用。 4℃保存可延长产品保质期,长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1. PBS溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生,请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2. PBS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
RNAEx ZOL Reagent 货号:EK-5301中文名称:RNAEx ZOL RNA提取试剂(同Thermo的Trizol)规格:200ML应用:RNA提取运输条件:常温运输 【保存条件】 4ºC 避光保存一年 【概述】 RNAEx ZOL Reagent 是即用型细胞和组织总 RNA 提取试剂,该试剂是一步法苯酚和异硫氰酸胍解决方案。该试剂可保持样品 RNA 的完整性,同时破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分享成水相和有机相。RNA 存于水相,通过异丙醇沉淀回收。 此方法可完美应用于少量人类、动物、植物或细菌来源的组织和细胞,允许大量样本同时处理。整个过程可在一小时内完成,同时可避免蛋白质和 DNA 污染。 【操作方法】 1. 样品处理: a. 组织:将组织在液氮中研磨,磨碎后及时于每 50-100mg 组织中加入 1ml RNAEx ZOL Reagent,样品体积不应超过 RNAEx ZOL Reagent 体积的 10%(或使用匀浆仪器)。 b. 单层细胞:直接在培养皿中裂解细胞,如35mm直径的培养皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent,使用吸头吹匀促进细胞裂解。RNAEx ZOL Reagent 的试剂量基于培养的表面积而不是细胞数量(每 1cm2加入 1ml RNAEx ZOL Reagent), RNAEx ZOL Reagent试剂量不足可能会导致分离出的 RNA 有 DNA 污染。 c. 悬浮细胞:先低速离心沉淀细胞,弃培养液后加入 RNAEx ZOL Reagen(t 1ml RNAExZOL Reagent 加入至 5×106动物、植物、酵母或细菌细胞中)。加入 RNAEx ZOL Reagent 前避免洗涤细胞,这容易导致 mRNA 降解。一些酵母和细菌细胞的裂解可能需要使用均质器。 可选:一些样品可能需要额外的分享步骤,这些样品蛋白质、脂肪、多糖或细胞外基质含量高,如肌肉、脂肪组织、以及部分植物块茎。在根据上述方式处理后,于2-8°C,12000g 离心 10 分钟,移除沉淀不溶物,RNA 存于上清中。 2. 相分离 a. 将加完 RNAEx ZOL Reagent 后的样品在室温(15-30°C)静置 5 分钟,以利于样品核蛋白体完全分离 b. 按每 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.2ml 氯仿(自备),小心盖好样品管后,剧烈震荡 15 秒,后置于室温(15-30°C)静置 2-3 分钟。 c. 2-8°C,10000g 离心 15 分钟。离心后,混合物分离为下层(酚-氯仿相)、中间相以及上层无色水相。RNA 存在于上层无色水相中,体积约为最初加入 RNAEx ZOL Reagent 体积的 60%左右。 RNA 分离提取步骤: 1. RNA 沉淀 a. 将上述水相转移到一个新的管中,并保存有机相(若希望分离 DNA 或蛋白质)。混合异丙醇从水相中沉淀 RNA,每 1ml 用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 使用 0.5ml 异丙醇,室温(15-30°C)静置 10 分钟。 b. 2-8°C,10000g 离心 10 分钟。离心前看不出 RNA 沉淀,离心后在管侧和管底会出现胶状沉淀即为 RNA 沉淀。 2. RNA 洗涤 a. 弃上清。用 75%乙醇洗涤 RNA 沉淀一次,每毫升用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 试剂使用至少 1ml 75%乙醇,涡旋混匀后于 2-8°C,不超过 7500g 离心 5 分钟,弃上清 3. 溶解 RNA a. 在上述过程结束后,简单干燥 RNA 沉淀(空气干燥或真空干燥 5-10 分钟,不要真空离心离心干燥 RNA)。重要的是不要让 RNA 沉淀过于干燥,这将大大降低其溶解度。加入 25-200μl 无 RNase 水或 0.5% SDS,用吸头吹打几次至溶解,于 50-60°C 放置 10 分钟使 RNA 彻底溶解(注:若后续进行酶学实验,请勿使用 0.5% SDS 溶液溶 解)。溶解后置于-80°C 保存。 DNA 分离提取步骤: 1. DNA 沉淀 a. 样品加入氯仿分层后,移去上层水相提取 RNA,吸取中间层和有机层的 DNA 用乙醇沉淀。每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.3ml 无水乙醇混匀,室温静置 2-3 分钟,2-8°C 不超过 2000g 离心 5 分钟以沉淀 DNA。 2. DNA 洗涤 a. 移去苯酚-乙醇上清液(如需要,保存上清用于蛋白质分离,操作见下)。用 0.1M 的柠檬酸钠溶液(溶于 10%乙醇的柠檬酸钠溶液)清洗沉淀的 DNA。每毫升用于初始的 RNAEx ZOL Reagent 试剂添加 1ml 溶液。每次清洗时,室温静置 30 分钟 DNA沉淀(间歇混匀),2-8°C 2000g 离心 5 分钟,弃上清。重复一次。 b. 用 75%乙醇再洗一遍 DNA 沉淀,每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 1.5-2ml 75%乙醇,室温放置 10-20 分钟(间歇混匀),2-8°C 2000g 离心 5 分钟,弃上清。 c. 室温放置晾干 DNA 5-15 分钟,用 8mM NaOH 溶解 DNA。从 50-70mg 组织或 107细胞中分离的 DNA 溶于 300-600μl 8mM 的 NaOH 溶液中,浓度常为 0.2-0.3μg/μl。 注:提取的 DNA 沉淀不易溶于水和 Tris 缓冲液中,建议用弱碱溶解,8mM NaOH 的 pH值为 9,NaOH 溶液溶解后可用 TE、HEPES 调节 PH。从某些样品(尤其是组织)中提取的 DNA 中可能包含一些胶状不溶物可用>12000g 离心 10 分钟除去。 蛋白质分离操作步骤: 1. 蛋白质沉淀 a. 苯酚-乙醇上清液(每 1ml RNAEx ZOL Reagent 试剂上清体积约 0.8ml)中加入异丙醇可沉淀出蛋白质。每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 1.5ml 异丙醇,室温静置 10 分钟,然后 2-8°C 12000g 离心 10 分钟以沉淀蛋白质,弃上清。 2. 蛋白质洗涤 a. 用 0.3M 盐酸胍溶液(溶于 95%乙醇)洗涤蛋白质沉淀 3 次。每毫升每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 2ml 0.3M 盐酸胍溶液。每次洗涤中,室温静置 20 分钟,2-8°C 7500g 离心 5 分钟,弃上清,重复 3 次。最后清洗后,加入 2ml 无水乙醇,漩涡混匀蛋白沉淀,室温静置 20 分钟,然后 2-8°C 7500g 离心 5 分钟以沉淀蛋白质,弃上清。 3. 蛋白质溶解 a. 干空干燥蛋白质沉淀 5-10 分钟,用 1% SDS 溶解蛋白质,反复吹打,50°C 温浴至完全溶解,不溶物 2-8°C 10000g 离心 10 分钟去除。分离得到的蛋白质样品可用于WesternBlot 或者-20°C 保存(长期保存建议-80°C) 1. RNA 酶污染注意事项: a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌,吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管 b. 佩戴手套及口罩及护目镜:皮肤上常含有细菌和霉菌,可污染 RNA 制备,且同时是RNA 酶来源,同时 RNAEx ZOL Reagent 对皮肤有一定毒性,建议佩戴手套及口罩及护目镜。 c. 尽量于通风橱内提取:避免吸入提取过程中有毒物质。 2. 安全性问题: a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性,可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适,应立即就医 3. 存储性问题: a. 实验已证明 RNAEx ZOL Reagent 室温下可稳定保存 12 个月,不过依然建议储存于2-8°C 以保证最佳性能,尽量避光保存。
RNA提取辅助试剂100ml(氯仿替代物),可有效避免氯防购买不到的烦恼可以代替氯仿使用,并且毒性较小。在单步 TRI 试剂方法中使用可以减少 DNA 污染 RNA 的可能性,本品不会对分离的 RNA 的质量或数量产生不利影响。 【操作方法】1. 请按每使用 1ml TRI 试剂(Trizol 试剂或 RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂)加入 200μl 比例来使用(等同RNA 提取中氯仿的使用)。 【注意事项】1. 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用,以免污染。2. RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂(货号:EK-5301)可在 ECOTOP 各平台咨询购买。3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作