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植物总RNA提取试剂盒Ⅱ
产品细节图:
植物总RNA提取试剂盒Ⅱ
品牌:genefist | 货号:GF432
所属大类
: 试剂
所属小类
: 常用生化试剂
品牌
: genefist
规格
: 50次
原价
: ¥1024.00
促销价
:
¥1024.00
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储存条件
DNase I(DNase I 冻干粉溶解于专用保存液),储存于-20℃;其他试剂室温(15-25℃)保存。
产品简介
由于植物的细胞结构和代谢活性在物种、组织类型和发育阶段之间可能存在显著差异,因此没有一种通
用的裂解溶液或独特的方法可以同样适用于所有植物样品。
GF432 试剂盒所含“裂解液 RL”,是依据硫氰酸胍的原理,可用于许多植物组织,此裂解液操作简单快
速,提取量稳定,可同时处理大量不同样品。本试剂盒提取的总 RNA 纯度高,基本没有基因组、蛋白和其它
杂质的污染,可用于 PCR、Blot、分子克隆等多种下游实验。
对于富含淀粉、多酚和次级代谢物(如一些木本植物、胚乳、块茎以及丝状真菌的菌丝体)的植物组织,
因为“裂解液 RL”加入后,会使样本变粘稠甚至凝固,建议选用另一裂解方案(产品目录号:TR02 或者
GF441)。
预防RNase污染,应注意以下几方面
1.经常更换新手套,因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。
2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻
璃器皿可在150℃烘烤4 h,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去
除RNase。
4.配制溶液应使用无RNase的水(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(V/V),高压灭菌)。
使用前注意事项
1.裂解液 RL:使用前请添加 300ul 巯基乙醇,
添加过巯基乙醇的裂解液 4℃保存。
2.漂洗液 PW:使用前请添加 64ml 无水乙醇。
3.为确保 RNA 的品质及产量,应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取,或将组织立即以液氮冷冻,储存
于-70℃,组织亦可保存在 RANstore 样本保存液(目录号:TR38)中。
操作步骤
本试剂盒
不适用于
富含淀粉、酚类和次级代谢物的植物组织(例如一些木本植物,胚乳或丝状真菌的菌
丝体),因为“裂解液 RL”在加入至样本粉末后,会变固态或非常粘稠,此类植物组织请使用另一裂解方案
(产品目录号:TR02)。
1.匀浆处理
50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末,加入 450 μl RL
(使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙
醇)
,涡旋剧烈震荡混匀,并于 56℃孵育 3 分钟。
注意 1:在 56℃孵育 1-3 min 将有助于植物组织裂解,但是对于某些富含淀粉的样品,请不要加热处理,
防止因淀粉引起的样品膨胀现象。
注意 2:由于植物多样性非常丰富,而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同,
请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
2.将所有溶液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心 2-5 min,小心吸
取收集管中的上清至 RNase-Free 的离心管中,吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
注意:由于裂解液较粘稠,所以将溶液转移至过滤柱时,可以剪去部分吸头末端。
3.缓慢加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀),转至
“RNA 提取”步骤。
4.将所得“裂解液/乙醇混合液”(含沉淀),移取至吸附柱 CR1 中(吸附柱 CR1 放入收集管中),12,000 rpm
(~13,400×g )离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。
注意:将溶液和沉淀转移至吸附柱 CR1 时,如果体积大于吸附柱容量,可以分次完成。
5.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW,12,000 rpm (~13,400×g )离心离心 1 min,丢弃滤液,将吸附柱
CR1 放回收集管中。
6.DNase Ⅰ降解。
每一纯化反应,请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管
以混合均匀,请勿震荡),将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心,于室温(25~28℃)孵育
15 分钟。
注意:如同时操作多组样本,请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。
7.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸
附柱 CR1 放回收集管中。
8.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW
(使用前请先检查是否已加入乙醇)
,12,000 rpm(~13,400×g) 离
心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。
9.重复操作步骤 8。
10.12,000 rpm(~13,400×g)离心 3 min,将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余
的乙醇。
注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻,以充分晾干。
如果有漂洗液残留,可能会影响后续的 RT 等实验。
11.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中,加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心,室
温静置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,得到 RNA 溶液。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl,体积过小影响回收效率;RNA 溶液请于-70℃保存。
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1.
《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
作者:Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子:4.259
期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID:
27353337
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