5% Milk Blocking Buffer【保存条件】 -20℃保存,有效期 1 年;4℃保存,有效期 1 个月。 【概述】 Western Blot 封闭液(Western Blot Blocking Buffer)适用于 Western Blotting、ELISA 以及 免疫组化实验中非特异性蛋白结合位点的封闭。封闭后,可以减小后续的一抗或二抗等和载 体的非特异性结合,降低背景,增强信噪比,以达到理想的显色效果。 【使用建议】 本产品为即用型,无需稀释。封闭步骤中加入足够量的封闭液充分覆盖载体表面,振荡封闭,封闭时间依据实验而定,一般室温封闭半小时至 1 小时,然后进行抗体孵育等后续 操作。 【注意事项】 1. 封闭液可 4℃保存,但容易染菌,如需长期保存,请放置于-20℃。 2. 通常在室温封闭 60 分钟即可。对于一些背景非常高的抗体,可以 4℃封闭过夜。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5% BSA Blocking Buffer【保存条件】 4℃保存,有效期 6 个月;-20℃保存,有效期 1 年 【概述】 5%BSA 封闭液(Blocking Buffer)适用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫组化实验中非特异性蛋白结合位点的封闭。封闭后,可以减小后续的一抗或二抗等和载体的非特异性结合,降低背景,增强信噪比,以达到理想的显色效果。 【使用建议】 本产品为即用型,无需稀释。封闭步骤中加入足够量的 BSA 封闭液充分覆盖载体表面, 振荡封闭,封闭时间依据实验而定,一般室温封闭半小时至 1 小时,然后进行抗体孵育等 后续操作。 【注意事项】 1. 封闭液可 4℃保存,但容易染菌,如需长期保存,请放置于-20℃。 2. 通常在室温封闭 60 分钟即可。对于一些背景非常高的抗体,可以 4℃封闭过夜。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1% BSA Blocking Buffer【保存条件】 -20℃保存,有效期 1 年 【概述】 1%BSA 封闭液(Blocking Buffer)适用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫组化实验中非特异性蛋白结合位点的封闭。封闭后,可以减小后续的一抗或二抗等和载体的非特异性结合,降低背景,增强信噪比,以达到理想的显色效果。 【使用建议】 本产品为即用型,无需稀释。封闭步骤中加入足够量的 BSA 封闭液充分覆盖载体表面, 振荡封闭,封闭时间依据实验而定,一般室温封闭半小时至 1 小时,然后进行抗体孵育等 后续操作。 【注意事项】 1. 封闭液可 4℃保存,但容易染菌,如需长期保存,请放置于-20℃。 2. 通常在室温封闭 60 分钟即可。对于一些背景非常高的抗体,可以 4℃封闭过夜。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
1×Ponceau S Solution【保存条件】 ℃保存,有效期 1 年 【概述】 丽春红(Ponceau S)也称猩红,可以用于 PVDF 膜、硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纤维素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的检测。丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。 丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS 或其它适宜的溶液洗去。 本试剂使用方便,本底低,灵敏度较高,对蛋白的检测下限是 250ng。 【使用建议】 1. 将 PVDF 膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在 1×丽春红染色液中,摇动 3-5 分钟 或更长时间,直至出现清晰条带。对结果作适当记录。 2. 用蒸馏水,PBS 或其它适当溶液漂洗 2-3 次,每次 3-5 分钟,去除丽春红,进行后续的 Western 检测。 【注意事项】 1. 丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
40% Acr-Bis Solution (37.5:1)【保存条件】 4℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 40% Acr-Bis Solution (37.5:1) 即为含 40% acrylamide-bisacrylamide 的水溶液,其中 acrylamide 和 bisacrylamide 的比例为 37.5:1。 40% Acr-Bis Solution (37.5:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE 胶),包括 SDS-PAGE 胶 等,可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,简称 Acr) 和交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,简称 Bis)在催化剂的作用下,通过自由基引发聚合反应,形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交 联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关,交联度由 Acr 与 Bis 的相对比例决定,调节单体丙烯酰胺与交联剂(Bis)的浓度比例,可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中 Bis 的浓度越低,凝胶的孔径越大,适用于分离较大的分子;Bis 的浓度越高,网孔越小,分辨率越高,越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
40% Acr-Bis Solution (19:1)【保存条件】 4℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 40% Acr-Bis Solution (19:1) 即为含 40% acrylamide-bisacrylamide 的水溶液,其中 acrylamide 和 bisacrylamide 的比例为 19:1。 40% Acr-Bis Solution (19:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE 胶),包括 SDS-PAGE 胶等, 可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,简称 Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,简称 Bis)在催化剂的作用下,通过自由基引发聚合 反应,形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关,交联度由 Acr 与 Bis 的相对比例决定,调节单体丙烯酰胺与交联剂(Bis)的浓度比例,可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中 Bis 的浓度越低,凝胶的孔径越大,适用于分离较大的分子;Bis 的浓度越高,网孔越小,分辨率越 高,越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
30% Acr-Bis Solution (37.5:1)【保存条件】 4℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (37.5:1) 即为含 30% acrylamide-bisacrylamide 的水溶液,其中 acrylamide 和 bisacrylamide 的比例为 37.5:1。 30% Acr-Bis Solution (37.5:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE 胶),包括 SDS-PAGE 胶 等,可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,简称 Acr) 和交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,简称 Bis)在催化剂的作用下,通过自由基引发 聚合反应,形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关,交联度由 Acr 与 Bis 的相对比例决定,调节单体丙烯酰胺与交联剂(Bis)的浓度比例,可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中 Bis 的浓 度越低,凝胶的孔径越大,适用于分离较大的分子;Bis 的浓度越高,网孔越小,分辨率越高,越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体 内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE Separating Gel Buffer,4×(pH 8.8)【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 本试剂是由 Tris 和 SDS 混合而成的,主要用于 SDS-PAGE 凝胶(变性聚丙烯酰胺凝胶) 制备实验。配制浓缩胶时,10ml 制胶体系中加入 2.5ml(4 倍稀释)。 【使用建议】 根据目标蛋白分子量选取凝胶浓度,按下表配制。先配分离胶,再配浓缩胶。 表格仅供参考,具体添加量根据所需凝胶溶液总体积将 4×SDS-PAGE 分离胶缓冲液稀释成 1×即可。【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE spacer Gel Buffer,4×(pH 6.8)【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 本试剂是由 Tris 和 SDS 混合而成的,主要用于 SDS-PAGE 凝胶(变性聚丙烯酰胺凝胶) 制备实验。配制浓缩胶时,10ml 制胶体系中加入 2.5ml(4 倍稀释)。 【使用建议】 根据目标蛋白分子量选取凝胶浓度,按下表配制。先配分离胶,再配浓缩胶。 表格仅供参考,具体添加量根据所需凝胶溶液总体积将 4×SDS-PAGE 浓缩胶缓冲液稀释成 1×即可。【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Native-PAGE loading buffer,4×【保存条件】 -20℃保存,有效期 1 年 【概述】 4×非变性蛋白上样缓冲液中不含 SDS 及 DTT 或者β-巯基乙醇,适合于常规的非变性 PAGE 蛋白样品的电泳。内含溴酚蓝作为电泳进度追踪染料。 【使用建议】 1. 室温解冻 4×非变性蛋白上样缓冲液。 2. 请按每 10μl 蛋白样品加入 30μl 上样缓冲液的比例(4 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后直接上样电泳。 4. 通常电泳时蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH 值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。
Tris-Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer,2×(with DTT)【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液 (含 DTT)用于 Tricine-SDS-PAGE 电泳时作蛋白质上样用。其主要成份为 SDS,DTT,考马斯亮蓝,缓冲盐溶液等。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除 了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子 的二级和三级结构,DTT 可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了 蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子 量大小有关。考马斯亮蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。 【使用建议】 1. 室温解冻 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液。 2. 请按每 10μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可。 【注意事项】 1. DTT 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Tris-Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer,2×(with DTT)【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液 (含 DTT)用于 Tricine-SDS-PAGE 电泳时作蛋白质上样用。其主要成份为 SDS,DTT,考马斯亮蓝,缓冲盐溶液等。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除 了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子 的二级和三级结构,DTT 可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了 蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子 量大小有关。考马斯亮蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。 【使用建议】 1. 室温解冻 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液。 2. 请按每 10μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可。 【注意事项】 1. DTT 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Tris-Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer,2×(with DTT)【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液 (含 DTT)用于 Tricine-SDS-PAGE 电泳时作蛋白质上样用。其主要成份为 SDS,DTT,考马斯亮蓝,缓冲盐溶液等。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除 了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子 的二级和三级结构,DTT 可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了 蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子 量大小有关。考马斯亮蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。 【使用建议】 1. 室温解冻 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液。 2. 请按每 10μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可。 【注意事项】 1. DTT 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE Loading buffer,4×(with β-Mercaptoethanol)【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 4×SDS-PAGE 单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在 SDS-PAGE 运行期间防止 pH 值变化。一些蛋白质对在 Tris 缓冲液中电泳期间温度波动引起 的 pH 变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在 SDS-PAGE 电泳之前的样品加热过程中 以及电泳过程中蛋白质降解。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS 还 可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。β-巯基乙醇可以断开 半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。 溴酚蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。 【使用建议】 1. 室温解冻 4×SDS-PAGE 单色蛋白上样缓冲液。 2. 请按每 30μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(4 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可。【注意事项】 1. β-巯基乙醇对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为 8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在 30kd 左右, 胶浓度为 12时,约在 20kd 左右,胶浓度为 15%时,大概在 10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH 值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液 可能会呈现深棕色,不影响产品使用。
2×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液(DTT)使用说明书【包装规格】产品编号产品名称包装ES-8154SDS-PAGE Loading buffer,2×(with DTT)10ml/100ml 使用说明书1份【保存条件】建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期1年【概述】2×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。【使用建议】1. 室温解冻2×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液。2. 请按每10μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。【注意事项】1. DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8153 SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,4×(with DTT) 1ml/10ml/100ml 使用说明书 1份 【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期1年 【概述】 4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyronin Y),用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温解冻4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液。 2. 请按每30μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。 【注意事项】 1. DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。 5. 一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。
4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)使用说明书【包装规格】产品编号产品名称包装ES-8153SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,4×(with DTT)1ml/10ml/100ml 使用说明书1份【保存条件】建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期1年【概述】4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyronin Y),用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。【使用建议】1. 室温解冻4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液。2. 请按每30μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。【注意事项】1. DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。5. 一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。
SDS lysis buffer【保存条件】 4℃保存,有效期 1 年。 【概述】 SDS 裂解液是一种较为强烈的细胞组织裂解液,可用于动物、植物的细胞或组织样品, 也可以用于真菌或细菌样品。SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、 Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。 【使用建议】 1.对于培养细胞样品: a.取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 b.对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋 白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 植物细胞宜在冰上裂解 2-10min。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。 对于悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照 6 孔板每 孔细胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。 对于细菌或酵母:对于 1ml 菌液或酵母液,离心去上清,如果有必要可以使用 PBS 洗涤一 次,充分去除液体后,轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200μl 裂 解液,轻轻涡旋或者弹击管底以混匀,冰上裂解 2-10min。如果希望获得更好的裂解效果, 细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解。 裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150μl 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200μl 或 250μl。每 100 万动物细胞用 100μl 本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为 2-4mg/ml,不同细胞所不同。 c.充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。2.对于组织样品: a.把组织剪切成细小的碎片。 b.融解 SDS 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的 最终浓度为 1mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 c.按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添 加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。) d.用玻璃匀浆器匀浆,或使用组织研磨仪研磨,直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液 氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂 解 10 分钟。 e.充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。每 20mg 冻存的小鼠肝脏组织用 200μl 本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓 度约为 15-25mg/ml,不同状态的不同组织有所不同。 f.如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品 裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀 浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀,可在 37ºC 水浴约 10 分钟以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解混匀后即可正常使用。 3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 4. 该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
IP/Co-IP Cell Lysis Buffer【保存条件】 4ºC 保存 【操作方法】 裂解贴壁细胞的方法(裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂): 1. 小心地从细胞中去除培养基。 用冰冷的 PBS 清洗一次。 2. 将冰冷 IP 细胞裂解缓冲液添加到细胞板中(6 孔板中每孔加入 200-400μl),并在冰上孵 育 5 分钟,中途不间断混匀。 3. 将裂解液转移至微量离心管中,以约 13,000×g 的速度离心 10 分钟,以在 4°C 下沉淀细 胞碎片。 4. 将上清液转移到新的试管中,以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 裂解悬浮细胞的方法(裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂): 1. 将细胞悬液以 1,000×g 离心 5 分钟以沉淀细胞,丢弃上清液。 2. 用冰冷的 PBS 洗涤细胞一次,以 1,000×g 离心 5 分钟以沉淀细胞。 3. 将冰冷的 IP 细胞裂解缓冲液添加到细胞沉淀中。每 50 mg 湿细胞沉淀(10:1 v / w)使 用 500μl 裂解缓冲液。 4. 在冰上孵育裂解物 5 分钟。通过在 4°C 下以〜13,000×g 离心 10 分钟去除细胞碎片。 5. 将上清液转移到新的试管中,以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。