Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit【保存条件】 -20℃保存一年 【使用建议(仅供参考)】 1. 准备溶液:室温融解试剂盒中的三种试剂,溶解后立即放置在冰上,混匀。取适当量的细 胞浆蛋白抽提试剂 CE I/II 及细胞核蛋白抽提试剂 NE 备用,在使用前数分钟内加入蛋白酶 抑制剂混合物及 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM(现配现用)。 A: 对于贴壁细胞:用 PBS 洗一遍,用细胞刮子刮下细胞,或用 EDTA 溶液处理细胞使细胞 不再贴壁很紧,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉 淀备用。(注:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。) B: 对于悬浮细胞:用预冷的 PBS 清洗一遍,离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细 胞沉淀备用。 2. 每 20 微升细胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I。(对于 200 万 HeLa 细胞,其细胞沉淀的体积大约为 20 微升或 40 毫克。) 2. 每 20 微升细胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I。(对于 200 万 HeLa 细胞,其细胞沉淀的体积大约为 20 微升或 40 毫克。)3. 最高速剧烈涡旋 5-10 秒,把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长 vortex 时间。)4. 冰浴 10-15 分钟。(过程中可适当涡旋 2-3 次)5. 4℃下 3000rpm 转速下离心 5 分钟。6. 收集上清液(上清为细胞质提取物,储存在-80℃或准备加入 Western Blot 实验中。注意此时沉淀并不致密)7. 将步骤 6 中沉淀重悬于 100 微升细胞浆蛋白抽提试剂 CE II 中。8. 4℃下 3000rpm 转速下离心 5 分钟,除去上清液(剩余沉淀为细胞核)。若想更好的清洗细胞核,可重复步骤 7 和步骤 8 一次。9. 向此沉淀物中添加等体积的细胞核蛋白抽提试剂 NE(即,如果沉淀为 40 µL,则添加 40µL NE)10. 将沉淀重悬并在冰上孵育 10 分钟(过程中可适当涡旋 3-5 次)。11. 在 4℃下以 14,000 rpm 离心 5 分钟。12. 收获上清液(这是核提取物)。13. 将提取物储存在-80℃或准备加入 Western Blot 实验中。【注意事项】1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
RNA Holder Stabilization Solution【保存条件】 室温(15-30℃)保存一年 【概述】 RNA holder 是一种无毒的可直接使用的样品储存液,能迅速稳定组织,保护非冷冻细 胞 RNA 于原位。可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的 RNA。组织获取后立即浸入 RNA holder 保存液中,在室温可以保存 7 天,4℃可以保存 4 周,-20℃、-80℃标本可以长期保存, RNA 稳定存在不降解,取出后用各类方法抽提可以获得高质量的 RNA。 【操作方法】 1. 根据要保存的各样本的体积,计算出所需 RNA holder 用量。RNA holder 的用量应当是组 织体积的 10 倍(如 100mg 组织约用 1ml RNA holder);离心收集 2×106 细胞 RNA holder 的用量是 1ml。 2. 将 RNA holder 按需要量分装入自备保存管中; 3. 快速将较大的组织切成任何一边最大厚度不大于 0.5cm 大小,然后将组织碎块放入到 10 倍体积的 RNA holder 中保存。注:组织过厚则 RNA holder 不能有效渗入,组织中间部位的 RNA 不能受到保护。 4. 保存时先将样本浸入 RNA holder 后置 4℃冰箱过夜(使 RNA holder 完全渗入到组织中), 然后转移至-20℃冰箱(RNA holder 在-20℃仍为液态,有结晶析出为正常情况),或者过夜 取出后直接转移至-80℃,可反复冻融 20 次不影响 RNA 质量。 【注意事项】 1. 组织和细胞取材要快速,防止 RNA 降解。冰冻组织不能用 RNA holder 保存,因其不能 有效渗入冰冻组织中。 2. 保存样品的提取:组织样本从-20℃或-80℃取出后,复苏到室温后,取出组织块置于 RNA 提取液(如 Trizol)中再行提取。细胞样本复温后低速离心收集细胞,去除 RNA holder
Total Exosome Isolation Reagent(from cell culture media) 【保存条件】 4ºC 保存,有效期一年 【概述】 外泌体是含有复杂 RNA 和蛋白质的小囊泡(30-120 nm),所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使,在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号,然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 外泌体功能和运输的生物学研究要求完整的外泌体的分离,但是目前使用的方法繁琐,非特异性且困难。ECOTOP 细胞培养基上清外泌体提取试剂为从细胞培养基样品中浓缩完整外泌体提供了一种简单而可靠的方法。通过束缚水分子,从细胞培养基中分离总外泌体试剂可将溶解度较低的组分(即外泌体)从溶液中挤出,从而允许它们在短暂,低速离心后收集。ECOTOP 细胞培养基上清外泌体提取试剂可以从细胞培养基样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理: 1. 收集细胞培养基。 2. 以 2000×g 离心细胞培养基 30 分钟使细胞和碎屑沉淀。 3. 将不含细胞的上清液转移至新管中,注意不要吸到管底的细胞及碎屑。 外泌体分离: 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中,并加入 0.5 倍体积的ECOTOP 细胞培养基上清外泌体提取试剂。如 1ml 上清液加入 0.5ml 提取试剂,或10ml 上清液加入 5ml 提取试剂。 2. 将上清液与提取试剂吹打混匀或涡旋混匀。 3. 将混匀好的样品 2-8℃过夜孵育。 4. 孵育完成后,在 2-8℃条件下 10000×g 离心 1 小时。 5. 完成离心后,吸走并丢弃上清液,外泌体即包含在试管底部的沉淀中(大多数情况 下是不可见的)。 6. 加入合适体积的 1×PBS 或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表: 7. 当沉淀重新悬浮之后,所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在 2-8℃中保存 1 周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 本试剂可室温保存,4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片(重要!),合并相同的细胞培养液上清样品,装入无菌的玻璃瓶,可在 4℃短期保存(1-2 天),长期保存可冻存于-80℃。 3. 细胞上清分离后尽快进行外泌体分离,保存在 4℃和-80℃,都会对产量有一定的影响。 4. 做少量 WB 实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够,但为了足量分离 外泌体做 RNA 或蛋白质分析,我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 外泌体。 5. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol 或蛋白裂解液抽提RNA 或蛋白质或 1:100 PBS 稀释行粒径检测; 6. 本品仅限用于科研实验。
Total Exosome Isolation Reagent(from cell culture media) 【保存条件】 4ºC 保存,有效期一年 【概述】 外泌体是含有复杂 RNA 和蛋白质的小囊泡(30-120 nm),所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使,在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号,然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 外泌体功能和运输的生物学研究要求完整的外泌体的分离,但是目前使用的方法繁琐,非特异性且困难。ECOTOP 细胞培养基上清外泌体提取试剂为从细胞培养基样品中浓缩完整外泌体提供了一种简单而可靠的方法。通过束缚水分子,从细胞培养基中分离总外泌体试剂可将溶解度较低的组分(即外泌体)从溶液中挤出,从而允许它们在短暂,低速离心后收集。ECOTOP 细胞培养基上清外泌体提取试剂可以从细胞培养基样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理: 1. 收集细胞培养基。 2. 以 2000×g 离心细胞培养基 30 分钟使细胞和碎屑沉淀。 3. 将不含细胞的上清液转移至新管中,注意不要吸到管底的细胞及碎屑。 外泌体分离: 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中,并加入 0.5 倍体积的ECOTOP 细胞培养基上清外泌体提取试剂。如 1ml 上清液加入 0.5ml 提取试剂,或10ml 上清液加入 5ml 提取试剂。 2. 将上清液与提取试剂吹打混匀或涡旋混匀。 3. 将混匀好的样品 2-8℃过夜孵育。 4. 孵育完成后,在 2-8℃条件下 10000×g 离心 1 小时。 5. 完成离心后,吸走并丢弃上清液,外泌体即包含在试管底部的沉淀中(大多数情况 下是不可见的)。 6. 加入合适体积的 1×PBS 或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表: 7. 当沉淀重新悬浮之后,所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在 2-8℃中保存 1 周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 本试剂可室温保存,4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片(重要!),合并相同的细胞培养液上清样品,装入无菌的玻璃瓶,可在 4℃短期保存(1-2 天),长期保存可冻存于-80℃。 3. 细胞上清分离后尽快进行外泌体分离,保存在 4℃和-80℃,都会对产量有一定的影响。 4. 做少量 WB 实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够,但为了足量分离 外泌体做 RNA 或蛋白质分析,我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 外泌体。 5. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol 或蛋白裂解液抽提RNA 或蛋白质或 1:100 PBS 稀释行粒径检测; 6. 本品仅限用于科研实验。
Cell Counting Kit-8 【保存条件】4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效。【概述】Cell Counting Kit-8 试剂盒简称 CCK-8 试剂盒,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。【使用方法(仅供参考)】1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入 100μl 2×103个细胞,细胞毒性实验每孔加入 100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定,推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要,进行培养并给予 0-10μl 特定的药物刺激。2. 每孔加入 10μl CCK-8 溶液(如果起始的培养体积为 200μl,则需加入 20μl CCK-8 溶液,其它情况以此类推)。可以用加了相应体积细胞培养液和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。3. 在细胞培养箱内(37°C)继续孵育 0.5-4 小时,对于大多数情况孵育 1 小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在 0.5、1、2 和 4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。4. 在 450nm 测定吸光度。可以使用吸光度在 430-490nm 之间的滤光片,但是 450 nm 滤光片的检测灵敏度最高。5. 计算方法细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As:实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质)Ac:对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质)Ab:空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8)【注意事项】1. 初次实验可选择 3-5 个孔进行预实验选择合适的细胞数量。2. 由于使用 96 孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的 PBS、水或培养液;另一方面,可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。3. 当有还原性物质存在时会影响 CCK- 8 的测定,增加 OD 值;在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生,减小 OD 值;在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。4. 在做加药实验时,如果药物具有还原性,就会和 CCK- 8 试剂发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入 CCK- 8,测定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加 CCK-8) 的吸光度高,则证明药物有影响,可在加 CCK- 8 之前更换培养基,去掉药物的影响。5. 如果测定的 OD 值太低可适当增加细胞数量或延长加入 CCK-8 溶液后的染色时间。6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。7. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。8. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
开学季活动,买二赠一,数量有限,送完即止,先到先得 【保存条件】 4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8 试剂盒简称 CCK-8 试剂盒,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法(仅供参考)】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入 100μl 2×103个细胞,细胞毒性实验每孔加入 100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定,推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要,进行培养并给予 0-10μl 特定的药物刺激。 2. 每孔加入 10μl CCK-8 溶液(如果起始的培养体积为 200μl,则需加入 20μl CCK-8 溶液,其它情况以此类推)。可以用加了相应体积细胞培养液和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内(37°C)继续孵育 0.5-4 小时,对于大多数情况孵育 1 小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在 0.5、1、2 和 4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在 450nm 测定吸光度。可以使用吸光度在 430-490nm 之间的滤光片,但是 450 nm 滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As:实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac:对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab:空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择 3-5 个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用 96 孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的 PBS、水或培养液;另一方面,可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响 CCK- 8 的测定,增加 OD 值;在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生,减小 OD 值;在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时,如果药物具有还原性,就会和 CCK- 8 试剂发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入 CCK- 8,测定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加 CCK-8) 的吸光度高,则证明药物有影响,可在加 CCK- 8 之前更换培养基,去掉药物的影响。 5. 如果测定的 OD 值太低可适当增加细胞数量或延长加入 CCK-8 溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit【保存条件】2-8℃保存,有效期 1 年【概述】台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit),是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝,而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色研制而成。严格来说,台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性,通常认为细胞膜丧失完整性,即可认为细胞已死亡。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需 3-5 分钟即可完成,并且操作非常简单。本试剂盒足够检测 100 个细胞样品。【使用建议(仅供参考)】1. 收集细胞:对于贴壁细胞先用胰酶和/或 EDTA 消化下细胞。对于悬浮细胞,则可以直接收集细胞。把收集的细胞在 1000-2000g 离心 1 分钟,弃上清,用 1 毫升或根据细胞的量用适当细胞重悬液重新悬起细胞。2.台盼蓝染色:吸取 100 微升重悬的细胞到一塑料离心管内,加入 100 微升台盼蓝染色液(2X),轻轻混匀,染色 3 分钟(染色 3 分钟时间已经足够,染色时间可以更长一些,但不宜超过 10分钟)。注:对于重悬于细胞培养液中的细胞,也可以直接加入等体积的台盼蓝染色液(2X)进行染色。3.计数:吸取少量经过染色的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数 500 个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100%【注意事项】1. 本试剂盒提供的两种溶液都是无菌的,使用时最好在超净台内进行,避免细菌污染。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。3. 本产品长时间存放可能会出现少量颗粒状沉淀,可在 37ºC 水浴约 10 分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。4. 台盼蓝对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。5. 该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
SDS-PAGE Gel Preparation Kit产品介绍SDS-PAGE 蛋白电泳制胶试剂盒提供了配制 SDS-PAGE 凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制 PAGE 胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制 SDS-PAGE凝胶,也可用于配制非变性(native)PAGE 凝胶。本试剂盒约可配制 30-50 块常规大小的 PAGE 胶存储条件1M Tris-HCl pH8.8、10% SDS、凝胶聚合催化剂(粉末状态)和 1M Tris-HCl pH6.8 室温保存。30% Acr-Bis(29:1)和 TEMED 4℃避光保存。凝胶聚合催化剂加水配制成 10%溶液后,分装成小管-20℃保存,通常半年内有效(建议分次称量配制)。需要额外准备的材料□ 制胶器具□ 去离子水开始前试剂准备 使用前应配制新鲜的 10%凝胶聚合催化剂溶液,且在-20℃分装冻存。最优是分批使用前配制,尽量不要一次全部配制使用。
Bradford Protein Assay Kit 【包装规格】 【保存条件】 BSA 存于-20℃,其它试剂 4℃保存稳定 12 个月。【概述】考马斯亮兰 G-250 染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由 465nm 变为 595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达 1M,二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS 的浓度低于 0.1%,Triton X-100 低于 0.1%,Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。【使用方法】1. 蛋白标准液的准备a. 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。b. 按照下表配制 0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml 蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置 0.0625mg/ml 的蛋白标准。2. 蛋白浓度测定a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 250µl G250 染色液。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2 小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。【注意事项】1. 本品 BSA 因每次使用量较小,推荐分装使用。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)3. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。4. 将 G250 染色液回复至室温后使用,有利于提高检测灵敏度。5. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
BCA Protein Assay Kit 【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓 度下限达到 25µg/ml,最小检测蛋白量达到 0.5µg,待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保 EDTA 低于 10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依据样品数量,将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液,并充分混匀。 注:配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值(多孔则为平均 OD)为纵坐标c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度 x=0.37mg/ml)【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶,可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。
BCA Protein Assay Kit 【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓 度下限达到 25µg/ml,最小检测蛋白量达到 0.5µg,待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保 EDTA 低于 10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依据样品数量,将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液,并充分混匀。 注:配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值(多孔则为平均 OD)为纵坐标c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度 x=0.37mg/ml)【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶,可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。
10% SDS Solution 【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 SDS 即 Sodium dodecyl sulfate,中文名为十二烷基硫酸钠。常用生化试剂,用途广泛,可以用于 SDS-PAGE、细菌碱裂解等。10% SDS 溶液为 100ml 溶液中含有 10g SDS,该溶液用超纯水配制,经 022μm 滤膜过滤处理。 【注意事项】 1. 环境温度较低时,10% SDS 溶液会产生大量白色沉淀,可通过 37℃水浴促溶。 2. 本产品对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
30%丙烯酰胺溶液 (29:1)使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-817430% Acr-Bis Solution (29:1)100ml/500ml使用说明书 1份 【保存条件】 4℃避光保存,有效期1年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (29:1) 即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例为29:1。 30% Acr-Bis Solution (29:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE胶),包括SDS-PAGE胶等,可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,简称Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,简称Bis)在催化剂的作用下,通过自由基引发聚合反应,形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关,交联度由Acr与Bis的相对比例决定,调节单体丙烯酰胺与交联剂(Bis)的浓度比例,可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中Bis的浓度越低,凝胶的孔径越大,适用于分离较大的分子;Bis的浓度越高,网孔越小,分辨率越高,越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
ECOTOP生产的苏木素伊红(HE)染色试剂盒(Hematoxylin and Eosin Staining Kit)综合了多种经典的HE染色方法,例如Harris法、Mayer法等,简化了操作步骤,缩短了操作时间,并且染色液内不使用汞、甲醇等有毒试剂。可以用于组织切片或培养细胞的染色。苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中,双链上的磷酸基团向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合,从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法,不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料,在水中解离成带负电荷的阴离子,可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合,从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色,与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比,从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色,细胞浆呈现粉红色或红色。
Hygromycin B solution 50mg/ml 10ml【保存条件】4℃保存,一年有效【概述】潮霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素,可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌,真菌和高级真核生物。潮霉素 B最初是作为抗蠕虫药开发的,在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。【操作方法】1. 常用筛选浓度注意:潮霉素 B 用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为 50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞 50-500μg/mL;细菌/植物细胞 20-200μg/mL;真菌 300-1000μg/mL。2. 杀灭曲线的建立注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择 5 个浓度。1)第一天:未转化的细胞按照 20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2 培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定 50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例将母液稀释到 5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。3)第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。4)接下来每 3-4 天更换新的含药物培养基。5)按照固定的周期(如每 2 天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是 7-10 天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。3. 稳定转染细胞的筛选1)转染 48h 后,用含有适当浓度的潮霉素 B 筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过 25%。2)每隔 3-4 天更换含有药物的筛选培养液。3)筛选 7 天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。4)挑取并转移 5-10 个抗性克隆于 35mm 细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养 7 天。5)之后更换正常培养基培养即可。【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。
【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 5×SDS-PAGE 双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE 运行期间防止 pH 值变化。一些蛋白质对在 Tris 缓冲液中电泳期间温度波动引起的 pH 变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在 SDS-PAGE 电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT 可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyroninY),用于在 Western 印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或 37℃水浴解冻 5×SDS-PAGE 双色蛋白上样缓冲液,并摇晃混匀。2. 请按每 40μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(5 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可【注意事项】 1. DTT 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。2. 该产品于-20℃保存时会出现 SDS 沉淀,使用前请确保溶液完全复溶混匀,有必要时可置于 37℃水浴促溶。3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH 值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为 8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在 30kd 左右, 胶浓度为 12%时,约在 20kd 左右,胶浓度为 15%时,大概在 10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。5. 一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的 SDS 聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。