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细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒100T
基本售价：599.00元
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit【保存条件】 -20℃保存一年【使用建议（仅供参考）】 1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I/II 及细胞核蛋白抽提试剂 NE 备用，在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合物及 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM（现配现用）。 A: 对于贴壁细胞：用 PBS 洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用 EDTA 溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。（注：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。） B: 对于悬浮细胞：用预冷的 PBS 清洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。2. 每 20 微升细胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂CE I。（对于 200 万 HeLa 细胞，其细胞沉淀的体积大约为 20 微升或 40 毫克。) 2. 每 20 微升细胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I。（对于 200 万 HeLa 细胞，其细胞沉淀的体积大约为 20 微升或 40 毫克。)3. 最高速剧烈涡旋 5-10 秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长 vortex 时间。)4. 冰浴 10-15 分钟。（过程中可适当涡旋 2-3 次）5. 4℃下 3000rpm 转速下离心 5 分钟。6. 收集上清液（上清为细胞质提取物，储存在-80℃或准备加入 Western Blot 实验中。注意此时沉淀并不致密）7. 将步骤 6 中沉淀重悬于 100 微升细胞浆蛋白抽提试剂 CE II 中。8. 4℃下 3000rpm 转速下离心 5 分钟，除去上清液（剩余沉淀为细胞核）。若想更好的清洗细胞核，可重复步骤 7 和步骤 8 一次。9. 向此沉淀物中添加等体积的细胞核蛋白抽提试剂 NE（即，如果沉淀为 40 µL，则添加 40µL NE）10. 将沉淀重悬并在冰上孵育 10 分钟（过程中可适当涡旋 3-5 次）。11. 在 4℃下以 14,000 rpm 离心 5 分钟。12. 收获上清液（这是核提取物）。13. 将提取物储存在-80℃或准备加入 Western Blot 实验中。【注意事项】1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
BCA蛋白浓度测定试剂盒
基本售价：390.00元
BCA Protein Assay Kit 【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年BCA 试剂 B 室温保存 1 年蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一 BCA 法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到 25µg/ml，最小检测蛋白量达到 0.5µg，待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有较好的线性关系。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达 5%的 SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA低于 10mM，无 EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液：依据样品数量，将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液，并充分混匀。注：配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可 37℃水浴促溶。2.稀释蛋白标准品：蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表：3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl，需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时，或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在 2小时内测定，2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值（多孔则为平均 OD）为纵坐标c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度 x=0.37mg/ml）【注意事项】1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同，得到 OD 有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶，可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为 595nm。
DNA凝胶试剂盒100T
基本售价：250.00元
从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收70bp-100Kbp DNA片段产品组成产品介绍本试剂盒采用可高效、专一结合 DNA 的硅基质材料和独特的缓冲液系统，可从各种浓度的 TAE 或TBE 琼脂糖凝胶上回收 70bp-10kbp 大小的 DNA 片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收率可达 80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的 DNA 量为 20μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。存储条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存 12 个月，更长时间的保存可置于 2-8℃。2-8℃保存条件下，Buffer QG 可能产生沉淀，使用前可在 55℃水浴中预热 10 min 以溶解。需要额外准备的材料□ 无水乙醇（96%-100%）□ 无菌 1.5ml 离心管开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。□ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。□ 如下一步实验要求较高，核酸电泳时则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。□ 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA 造成损伤。□ 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测 pH 值，如 pH 值大于 7.5，可向含有 DNA 的胶溶液中加10-30µl 3M 醋酸钠（pH5.2）将 pH 值调到 5-7 之间。□ 回收<70bp 或>10kb 的 DNA 片段时，应加大 Buffer QG 的体积，延长吸附和洗脱时间。□ 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响，请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。开始前试剂准备□ 按瓶子标签所示，加入 4 倍体积的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温密封保存。□ 确认 Buffer QG 溶液显示为黄色。DNA 浓度及纯度检测 回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链DNA。 OD260/OD280 比值应为 1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用 ddH2O 比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。操作步骤：1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离 DNA 片段。当 DNA 片段分离后，将凝胶置于紫外灯下，用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的 DNA 凝胶。为避免 DNA 片段受到损伤，应尽量减少凝胶的紫外照射时间，切胶时应尽量切去多余凝胶。2. 放入 1.5ml 离心管中并称取凝胶块的重量，加入 3 倍体积的 Buffer QG（如凝胶称重结果为 100mg，则其体积约等于100µl，应加入 300µl Buffer QG）。对于>2%的琼脂糖凝胶，添加 6 倍体积的 Buffer QG。3. 50℃水浴 10min（或直至凝胶完全溶解即可），水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。注意：若回收<300bp 的 DNA 片段可在完全溶胶后加入一倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合 DNA 能力较强。4. 凝胶完全溶解后，检查颜色是否为黄色（类似于没有溶解琼脂糖的 Buffer QG）。如果混合物的颜色为橙色或紫色，则加入 10µl 3 M 醋酸钠(pH 5.0)并混合，混合物的颜色会变成黄色。DNA 吸附到膜上仅在 pH ≤ 7.5 时有效。Buffer QG 含有一种 pH 指示剂，在 pH ≤7.5 时为黄色，在较高 pH 时为橙色或紫色，可通过颜色轻松确定 DNA 结合的最佳 pH。5.（选做）向上述溶胶液中加入 1 倍凝胶体积的异丙醇并混合。例如，如果琼脂糖凝胶切片为 100mg，则添加 100µl 异丙醇。此步骤增加了≤500bp 和≥4 kb 的 DNA片段的产量。对于 500bp-4kb 之间的 DNA 片段，添加异丙醇对产量没有影响。6. 将吸附柱套在 2ml 收集管中，并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。吸附柱最大容量为 700µl，若样品体积大于 700µl，可分批加入；为提高回收率，可短暂离心用于溶胶的 1.5ml 离心管后再将溶液转移如吸附柱。7. 向吸附柱中加入 500µl Buffer PW（已加入无水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。注意：如果回收的 DNA 是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入 Buffer PW后静置 2-5min 后再离心。8. 重复操作步骤 7 一次9. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心 2min 以干燥吸附柱膜，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml 离心管中并于室温开盖放置 5-10min 彻底晾干。注意：Buffer PW 中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。10. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加 30-50µl Buffer EB，盖上盖子室温静置 2min 后，最大转速 (~13,400×g)离心 2min 收集 DNA 溶液并置于-20℃保存。注意：洗脱体积不应小于 30μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用 ddH2O 做洗脱液，并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。为了提高 DNA 的回收量，可重复操作步骤 10 一次。常见问题：1.回收效率低 凝胶未充分溶解:溶胶时，50~55℃水浴 10min，其间颠倒混匀数次，让凝胶充分溶解。 凝胶用量过多:过量的凝胶会降低回收率，切胶时尽量去除多余的凝胶。 溶胶液不足：3 倍体积的 Buffer QG 是为了保证在各种浓度的琼脂糖凝胶中都能有较好的回收率，尽量不要节省。 洗脱不充分：建议用 Buffer EB 洗脱两次，以获得最高的回收率，洗脱液必须加入柱子的膜中央。 试剂准备有误：Buffer PW 没有加入乙醇稀释或体积不准确(乙醇浓度需控制在 80%)。2. 回收后出现杂带 DNA 变性：有些 DNA 片段对温度比较敏感，杂带有可能是单链的 DNA。降低溶胶温度至 37~50℃。降低温度，可延长溶胶时间至 20~40min 让凝胶充分溶解。3. 盐污染 A260/230 太低：Buffer QG 溶液中的异硫氰酸胍在 A230 中有较高的吸收峰。使用该产品，A260/230 通常小于 1.0。实验表明，该产品得到的 DNA 不会影响下游的运用，包括测序，连接，定量 PCR，PCR，酶切等。4. 连接不理想 乙醇污染：洗脱 DNA 前，打开柱子的盖子，空气干燥 10~15min 以彻底去除乙醇。 核酸变性：降低溶胶温度至 37~50℃。降低温度，可延长溶胶时间至 20~40min 让凝胶充分溶解。降低温度能有效减少核酸的脱嘌呤和变性的影响。
动物血液基因组小量提取试剂盒50T
基本售价：398.00元
从10-250ul血液及相关体液等样品中直接提取总DNA产品介绍 本试剂盒适用于哺乳动物血液核酸提取，不含苯酚等有毒化学试剂组分，采用独特的缓冲液配方 BufferIRB 最大限度去除血液抑制剂的影响，同时应用先进的硅胶膜吸附技术，操作简单、快速。得到的 DNA比传统试剂盒纯度更高，可直接用于酶切、转化、测序及 PCR 等分子生物学实验。 存储条件 本产品除 Proteinase K 溶液和 RNase 溶液外，可在室温(15~25℃)保存 12 个月。低温下 Buffer BL 或Buffer IRB 可能会有沉淀形成，使用时需 55℃水浴让沉淀完全溶解。Proteinase K 溶液和 RNase A 溶液冰袋运输，收到产品后请分装保存于-20℃。 需要额外准备的材料 □ 无水乙醇（96%-100%）□ 无菌 1.5/2ml 离心管开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。● Buffer BL 和 Buffer IRB 是如有混浊现象，可在 55℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。● 基因组提取所有步骤都在室温（15-25°C）下进行。 开始前试剂准备 □ 按瓶子标签所示，Buffer BL 及 Buffer IRB 中加入适量的无水乙醇稀释，于室温密封保存。 DNA 浓度及纯度检测 回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测纯度与浓度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链DNA。 OD260/OD280 比值应为 1.7-2.0，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用 ddH2O，比值会略低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 应用领域 该方案适合于从约 10μl-1ml 人类的抗凝血液、血清、血浆、尿液、或其它体液样品中直接提取总 DNA。该方案直接对样品进行裂解消化，获得的 DNA 包括了基因组 DNA(如淋巴细胞、线粒体 DNA、游离的DNA(>100bp)、以及病毒 DNA(如乙肝)等；
青链霉素混合液（100×）双抗
基本售价：150.00元
【保存条件】-20℃保存一年 【概述】细胞培养基中有时加入适量浓度的抗生素，可以有效防止微生物的污染。本品青霉素的含量为 10kU/ml，链霉素的含量为 10mg/ml。该溶液用 0.9%氯化钠配制，经 0.22μm 滤膜过滤除菌，使用时按照 100 倍稀释使用即可。 【使用建议（仅供参考）】1. 在无菌的细胞培养液中直接添加：按照每 500ml 细胞培养液添加 5ml 的比例加入青链霉素混合液(100×)，混匀即可使用。2. 配制细胞培养液时加入，然后再过滤除菌：配制细胞培养液时按照每配制 1L 细胞培养液加入 10ml 的比例加入青链霉素混合液(100×)，配制完成后过滤除菌即可使用。 【注意事项】1. 尽量减少反复冻融的次数。2. 注意无菌操作，尽量避免污染。3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Superstar飞克超敏ECL化学发光试剂盒
基本售价：500.00元
ECL Western Blotting Substrate 【保存条件】 4℃避光保存 12 月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物 系统，SuperStar ECL 超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂（具有极高灵 敏度和高信噪比）；可在日光灯下进行发光操作；发光迅速，荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)， 极其节省抗体。 【特点】 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或 PVDF 膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的 4 小时时间内提供稳定的信号持续时间，在最佳条 件下可产生长达 24 小时的光输出 稳定的试剂 - 8 小时工作溶液稳定性; 在 4℃下 1 年的试剂盒稳定性 更经济的抗体用量： 0.2 至 1.0μg/ mL 一抗（从 1 mg / mL 原液中 1：1000 至 1：5000 稀释） 10 至 50 ng / mL 二级抗体（从 1 mg / mL 原液中 1：20,000 至 1：100,000 稀释） 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链 亲和素-生物素-HRP 夹法。2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取 A:B=1:1 混合（如需要 1ml 发光液则取 500ul ECL A 液和 500ul ECL B 液混合），放入干净容器中混合。建议立即使用 工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液 (0.125ml 发光工作液/cm2 膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育 2 分钟，准备立即压片 曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促 反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。 为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开 X 光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将 Western Blot 膜贴在 保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹 Western Blot 膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余 的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 Western Blot 膜的保鲜膜固定在暗 盒内，蛋白带面向上。 6. 暗房内压 X 光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1～5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移 到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带 模糊。3. 发光工作液孵育约 2 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋 白条带 发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发 光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小 时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和 曝光。4. 由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000～1:4000， 二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带 的位置和大小。7. NaN3能抑制 HRP 活性，回收第二抗体应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。
GO3000 HiTrans转染试剂1ml
基本售价：350.00元
GO3000 HiTrans Reagent【保存条件】-20ºC 保存 2 年【概述】1. Ecotop 品牌高效转染试剂（GO3000 HiTrans Reagent），适用于真核哺乳动物细胞转染，有毒性低、转染效率高等特点。2. 适用于：293T/293A/HEK293/CHO/Hela 等哺乳动物细胞，转染效率可高达 90%以上。通常 293 细胞转染效率可以高达 90%以上。大多数常见的细胞例如 Hela 细胞、CHO 细胞等也都适合用该试剂转染，但效率比 293 细胞要略低一些。3. 应用：细胞瞬时转染、慢病毒包装、腺病毒包装、AAV 病毒包装、逆转录病毒包装4. 本试剂经过 0.22μm 过滤器除菌处理，可直接使用。【操作方法】1. 对于贴壁细胞（以下均以 6 孔板为例，其它培养皿或培养板请根据相应面积换算）：a. 将细胞培养于培养皿或培养板内，通常在铺板后 1-2 天内长到 70-90%。b. 在转染前 1-2 小时，吸去细胞培养液，更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液 2ml。c. 取 2-4μg 待转染的质粒 DNA (质粒总体积不宜超过 20μl，若有多种质粒请混匀)，以质量体积比 1：3 加入转染试剂 6~12μl（如 2μg 待转染的质粒 DNA 加入转染试剂 6μl）。d. 混匀后，室温孵育 3-5 分钟。e. 把 DNA-转染试剂混合物中加入 500μl opti-MEM（若无 opti-MEM 可使用无血清无双抗的 DMEM 或 1640，具体根据转染细胞使用的培养基）,充分混匀后静置 10-15 分钟。f. 后均匀滴加到整个 6 孔板内（加入前吸出原培养板中 500μl 培养基），并置于含 5%二氧化碳的 37ºC 细胞培养箱内培养。g. 在转染后 4-6 小时左右换液，更换为 2ml 新鲜的完全培养液，继续培养。h. 通常在转染约 24-48 小时后就可以检测到转染基因的表达。2. 对于悬浮细胞：www.ecotopbio.coma. 离心收集悬浮细胞，用 PBS 洗涤一次。b. 按照上面的步骤 c)、d)、e）制备 DNA-转染试剂-optiMEM 混合物。c. 每 106 个细胞的沉淀，用 500 微升 DNA-转染试剂-optiMEM 混合物重新悬浮，室温放置 15-20 分钟。d. 在一个 6 孔板孔内加入 1.5ml 完全培养液，然后加入来自上一步的细胞-500 微升 DNA-转染试剂-optiMEM混合物，混匀。e. 在含 5%二氧化碳的 37ºC 细胞培养箱内培养。f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同，在 4-6 小时后离心收集细胞，用 PBS 洗一次，然后用 2 毫升完全培养 液重新悬浮细胞，继续培养。g. 通常在转染约 24-48 小时后就可以检测到转染基因的表达。
0.25%胰酶溶液（含EDTA，含酚红）100ml
基本售价：100.00元
冰袋运输 Trypsin-EDTA (0.25%)这种液体胰蛋白酶配方内含 EDTA 和酚红。ECOTOP 胰蛋白酶-EDTA 由胰蛋白酶粉（来自猪胰腺的蛋白酶辐照混合物）制成。鉴于其消化强度，胰蛋白酶被广泛用于细胞解离、常规细胞培养传代以及初生组织解离。解离所需的胰蛋白酶浓度因细胞类型和实验要求而异。 【保存条件】4℃保存，一年有效。短期内不使用，可-20℃保存延长有效期。 【概述】0.25%胰酶细胞消化液(含 EDTA)含 0.25%胰酶、EDTA 和酚红，pH 值为 7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。 【使用建议（仅供参考）】1. 贴壁细胞的消化：a.吸去培养液，用无菌的 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。b.加入少量 0.25%胰酶细胞消化液(含 EDTA)，略盖过细胞即可，室温放置 30 秒至 2 分钟。不同的细胞消化时间有所不同。c.显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。d.如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g 离心 1 分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。 2. 组织的消化：a.不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。 【注意事项】1. 胰酶消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。2. 注意无菌操作，尽量避免污染。3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
双抗Plus-支原体抗生素复合物（100×）
基本售价：350.00元
Mycoplasma Antibiotics Mixture (100×) 【特别提醒】 1. 冻-20会有沉淀为正常现象，常温溶解后轻摇瓶子会溶解，不影响使用效果2. 干细胞、神经细胞、原代细胞等较为敏感细胞使用上要谨慎使用3. 常规细胞（尤其污染较严重的）在早期使用时会有部分细胞死亡为正常现象，培养3-5天后即正常，背景（40-100倍镜下）相对更为干净4. 可长期代替双抗使用，若早期培养后细胞干净了（使用1-2周后），可减半使用【保存条件】 -20℃保存两年有效；4℃保存一年有效 【概述】 细胞培养基中有时加入适量浓度的抗生素，可以有效防止微生物的污染。本品含有抗支 原体药物，在细胞培养中不需额外添加青霉素-链霉素双抗，使用时按照 100 倍稀释使用即 可。 【使用建议（仅供参考）】 1. 在无菌的细胞培养液中直接添加：按照每 500ml 细胞培养液添加 5ml 的比例加入双抗 Plus(100×)，混匀即可使用。 2. 配制非无菌细胞培养液时加入，然后再过滤除菌：配制细胞培养液时按照每配制 1L 细胞 培养液加入 10ml 的比例加入双抗 Plus(100×)，配制完成后过滤除菌即可使用。 【注意事项】 1. -20℃保存时易产生沉淀，室温或 37℃加热复溶摇匀即可。 2. 尽量避免反复冻融，建议分装使用。 3. 注意无菌操作，尽量避免污染。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 5. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。
1×PBS 缓冲液（无菌）（pH7.2-7.4）500ml
基本售价：60.00元
1×PBS缓冲液（无菌）使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8006 1×PBS buffer(pH7.2-7.4) (Sterile，without Ca2+，Mg2+) 500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 PBS（phosphate buffered solution）即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠. 本产品为1×工作液，经过除菌处理，可直接使用。 4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1. PBS溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生，请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2. PBS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
RNAEx ZOL总RNA提取试剂100ml（同Thermo的Trizol）
基本售价：520.00元
RNAEx ZOL Reagent 货号：EK-5301中文名称：RNAEx ZOL RNA提取试剂（同Thermo的Trizol）规格：200ML应用：RNA提取运输条件：常温运输 【保存条件】 4ºC 避光保存一年 【概述】 RNAEx ZOL Reagent 是即用型细胞和组织总 RNA 提取试剂，该试剂是一步法苯酚和异硫氰酸胍解决方案。该试剂可保持样品 RNA 的完整性，同时破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分享成水相和有机相。RNA 存于水相，通过异丙醇沉淀回收。 此方法可完美应用于少量人类、动物、植物或细菌来源的组织和细胞，允许大量样本同时处理。整个过程可在一小时内完成，同时可避免蛋白质和 DNA 污染。 【操作方法】 1. 样品处理： a. 组织：将组织在液氮中研磨，磨碎后及时于每 50-100mg 组织中加入 1ml RNAEx ZOL Reagent，样品体积不应超过 RNAEx ZOL Reagent 体积的 10%（或使用匀浆仪器）。 b. 单层细胞：直接在培养皿中裂解细胞，如35mm直径的培养皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent，使用吸头吹匀促进细胞裂解。RNAEx ZOL Reagent 的试剂量基于培养的表面积而不是细胞数量（每 1cm2加入 1ml RNAEx ZOL Reagent）, RNAEx ZOL Reagent试剂量不足可能会导致分离出的 RNA 有 DNA 污染。 c. 悬浮细胞：先低速离心沉淀细胞，弃培养液后加入 RNAEx ZOL Reagen（t 1ml RNAExZOL Reagent 加入至 5×106动物、植物、酵母或细菌细胞中）。加入 RNAEx ZOL Reagent 前避免洗涤细胞，这容易导致 mRNA 降解。一些酵母和细菌细胞的裂解可能需要使用均质器。 可选：一些样品可能需要额外的分享步骤，这些样品蛋白质、脂肪、多糖或细胞外基质含量高，如肌肉、脂肪组织、以及部分植物块茎。在根据上述方式处理后，于2-8°C，12000g 离心 10 分钟，移除沉淀不溶物，RNA 存于上清中。 2. 相分离 a. 将加完 RNAEx ZOL Reagent 后的样品在室温（15-30°C）静置 5 分钟，以利于样品核蛋白体完全分离 b. 按每 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.2ml 氯仿（自备），小心盖好样品管后，剧烈震荡 15 秒，后置于室温（15-30°C）静置 2-3 分钟。 c. 2-8°C，10000g 离心 15 分钟。离心后，混合物分离为下层（酚-氯仿相）、中间相以及上层无色水相。RNA 存在于上层无色水相中，体积约为最初加入 RNAEx ZOL Reagent 体积的 60%左右。 RNA 分离提取步骤： 1. RNA 沉淀 a. 将上述水相转移到一个新的管中，并保存有机相（若希望分离 DNA 或蛋白质）。混合异丙醇从水相中沉淀 RNA，每 1ml 用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 使用 0.5ml 异丙醇，室温（15-30°C）静置 10 分钟。 b. 2-8°C，10000g 离心 10 分钟。离心前看不出 RNA 沉淀，离心后在管侧和管底会出现胶状沉淀即为 RNA 沉淀。 2. RNA 洗涤 a. 弃上清。用 75%乙醇洗涤 RNA 沉淀一次，每毫升用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 试剂使用至少 1ml 75%乙醇，涡旋混匀后于 2-8°C，不超过 7500g 离心 5 分钟，弃上清 3. 溶解 RNA a. 在上述过程结束后，简单干燥 RNA 沉淀（空气干燥或真空干燥 5-10 分钟，不要真空离心离心干燥 RNA）。重要的是不要让 RNA 沉淀过于干燥，这将大大降低其溶解度。加入 25-200μl 无 RNase 水或 0.5% SDS，用吸头吹打几次至溶解，于 50-60°C 放置 10 分钟使 RNA 彻底溶解（注：若后续进行酶学实验，请勿使用 0.5% SDS 溶液溶 解）。溶解后置于-80°C 保存。 DNA 分离提取步骤： 1. DNA 沉淀 a. 样品加入氯仿分层后，移去上层水相提取 RNA，吸取中间层和有机层的 DNA 用乙醇沉淀。每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.3ml 无水乙醇混匀，室温静置 2-3 分钟，2-8°C 不超过 2000g 离心 5 分钟以沉淀 DNA。 2. DNA 洗涤 a. 移去苯酚-乙醇上清液（如需要，保存上清用于蛋白质分离，操作见下）。用 0.1M 的柠檬酸钠溶液（溶于 10%乙醇的柠檬酸钠溶液）清洗沉淀的 DNA。每毫升用于初始的 RNAEx ZOL Reagent 试剂添加 1ml 溶液。每次清洗时，室温静置 30 分钟 DNA沉淀（间歇混匀），2-8°C 2000g 离心 5 分钟，弃上清。重复一次。 b. 用 75%乙醇再洗一遍 DNA 沉淀，每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 1.5-2ml 75%乙醇，室温放置 10-20 分钟（间歇混匀），2-8°C 2000g 离心 5 分钟，弃上清。 c. 室温放置晾干 DNA 5-15 分钟，用 8mM NaOH 溶解 DNA。从 50-70mg 组织或 107细胞中分离的 DNA 溶于 300-600μl 8mM 的 NaOH 溶液中，浓度常为 0.2-0.3μg/μl。 注：提取的 DNA 沉淀不易溶于水和 Tris 缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mM NaOH 的 pH值为 9，NaOH 溶液溶解后可用 TE、HEPES 调节 PH。从某些样品（尤其是组织）中提取的 DNA 中可能包含一些胶状不溶物可用>12000g 离心 10 分钟除去。 蛋白质分离操作步骤： 1. 蛋白质沉淀 a. 苯酚-乙醇上清液（每 1ml RNAEx ZOL Reagent 试剂上清体积约 0.8ml）中加入异丙醇可沉淀出蛋白质。每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 1.5ml 异丙醇，室温静置 10 分钟，然后 2-8°C 12000g 离心 10 分钟以沉淀蛋白质，弃上清。 2. 蛋白质洗涤 a. 用 0.3M 盐酸胍溶液（溶于 95%乙醇）洗涤蛋白质沉淀 3 次。每毫升每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 2ml 0.3M 盐酸胍溶液。每次洗涤中，室温静置 20 分钟，2-8°C 7500g 离心 5 分钟，弃上清，重复 3 次。最后清洗后，加入 2ml 无水乙醇，漩涡混匀蛋白沉淀，室温静置 20 分钟，然后 2-8°C 7500g 离心 5 分钟以沉淀蛋白质，弃上清。 3. 蛋白质溶解 a. 干空干燥蛋白质沉淀 5-10 分钟，用 1% SDS 溶解蛋白质，反复吹打，50°C 温浴至完全溶解，不溶物 2-8°C 10000g 离心 10 分钟去除。分离得到的蛋白质样品可用于WesternBlot 或者-20°C 保存（长期保存建议-80°C） 1. RNA 酶污染注意事项： a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理：玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ，塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌，吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管 b. 佩戴手套及口罩及护目镜：皮肤上常含有细菌和霉菌，可污染 RNA 制备，且同时是RNA 酶来源，同时 RNAEx ZOL Reagent 对皮肤有一定毒性，建议佩戴手套及口罩及护目镜。 c. 尽量于通风橱内提取：避免吸入提取过程中有毒物质。 2. 安全性问题： a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性，可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适，应立即就医 3. 存储性问题： a. 实验已证明 RNAEx ZOL Reagent 室温下可稳定保存 12 个月，不过依然建议储存于2-8°C 以保证最佳性能，尽量避光保存。
RNA提取辅助试剂100ml（氯仿替代物）
基本售价：450.00元
RNA提取辅助试剂100ml（氯仿替代物）,可有效避免氯防购买不到的烦恼可以代替氯仿使用，并且毒性较小。在单步 TRI 试剂方法中使用可以减少 DNA 污染 RNA 的可能性，本品不会对分离的 RNA 的质量或数量产生不利影响。 【操作方法】1. 请按每使用 1ml TRI 试剂（Trizol 试剂或 RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂）加入 200μl 比例来使用（等同RNA 提取中氯仿的使用）。 【注意事项】1. 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，以免污染。2. RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂（货号：EK-5301）可在 ECOTOP 各平台咨询购买。3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
无DNA/RNA酶水(无菌)500ML
基本售价：140.00元
DNase/RNase-free water（DEPC treated,Sterile）【保存条件】 室温保存，有效期 1 年 【概述】 无酶无菌水是超纯水经 DEPC 处理后，再高压灭菌而得到的不含 DNA 酶或 RNA 酶的 无菌水。经检测无核酸酶和蛋白酶活性，可用于 cDNA 合成、体外转录、RNA 提取等对核 酸酶敏感的分子生物学试验和相关产品的稀释或溶解。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
伊文思蓝染色液（0.5%）
基本售价：130.00元
Evans Blue Stain Solution 0.5% 【保存条件】 室温保存，有效期 1 年 【概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式 C34H24N6Na4O14S4，分子量为 960.80，CAS号为 314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小和血浆白蛋白相近，而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。 伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中 0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞，但无法区分死亡和坏死。 【使用建议】 (一)血脑屏障通透性 1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射 Evans Blue Stain Solution(0.5%)数秒至 1 分钟，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取目的脑组织。 2. 脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，离心。 3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育 18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室温孵育 24h。 4. 1000g 离心 20～30 min 或 2000g 离心 15min。5. 取上述溶液 1～2ml，用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的 OD 值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色 1、取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内，加入 100μl 伊文思蓝染液轻轻混匀，染色 3min(染色时间可适当延长，但不宜超过 10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数 500 个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率＝(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性，请小心防护。 2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3. 血脑屏障通透性实验中，伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
GoldView II型核酸染色剂(10000×)1ml
基本售价：160.00元
GoldView II Nuclear Staining Dyes(10000×)【保存条件】 4℃长期保存，短期室温保存 【概述】 GoldViewⅡ是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测 DNA 时，可与核酸结合后能产生很强的荧光信号。 【操作方法】 1. 琼脂糖凝胶中添加 GoldViewⅡ： 根据需要配制适当浓度(例如 1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后，适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时，按照每 100ml 胶液加入 10µl GoldViewⅡ (比例 10000:1)。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的 DNA 或 RNA 在该胶中电泳后，用约 500nm 波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)，就可以观察到明亮的核酸条带。 2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色： 按照每 100ml 的 100mM NaCl 溶液或水中加入 10µl GoldViewⅡ，配制成染色工作液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中，加入适量上述配制好的 GoldViewⅡ染色工作液，确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色 20-30 分钟。染色的时间根据胶的厚度而定，胶厚则染色时间需要长一些，胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后，在紫外灯下即可观察核酸条带。 【注意事项】 1. GoldViewⅡ不属于有毒有害物质，并通过了环境安全相关测试，相关废弃物无需特殊处理，可参考常规化学试剂进行处理。 2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 3. GoldViewⅡ相对 EB 毒性较小，但为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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