选配试剂RNase A (100 mg/ml)目录号:GF020-01储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱,和独特的缓冲液系统,能高效、专一吸附 DNA,可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取酵母细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂,安全方便;提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。菌体浓度检测可采用分光光度计或平板培养法检测菌体量,一般对于酿酒酵母,OD600值为1.0时,相当于1-2×107cells / ml。注意事项1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。3.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。需要自备的试剂1.溶壁酶 Lyticase(目录号:GF0210-01)2.山梨醇 buffer:用0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)的配制:77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取酵母细胞(最多不超过5×107 cells),12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。2.酵母细胞壁的破除:酶法:向菌体中加入600 μl山梨醇buffer,加入大约200 U Lyticase(客户自备,目录号:GF1203-01),充分混匀。30℃处理30 min。4000 rpm(~1500×g)离心10 min,弃上清,收集沉淀。注意:以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量,根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同,所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。3. 向沉淀中加入200 μl溶液GA重悬沉淀,充分混匀。如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:GF020-01),振荡15 sec,室温放置5 min。4.加入20 μl Proteinase K溶液,混匀。5.加入200 μl溶液BG,充分颠倒混匀,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。6.加入 200ul 无水乙醇,充分振荡混匀 15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。7.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CG1 中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放回收集管中。8.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG,12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放入收集管中。注意:这一步骤对于清除内切酶是必不可少的,以防止污染。9.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放入收集管中。10.重复操作步骤 9。11.将吸附柱 CG1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。12.将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2-5 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min,将溶液收集到离心管中。注意:洗脱液体积不应少于 50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
选配试剂RNase A (100 mg/ml)目录号:GF0201-01;溶菌酶溶液(50 mg/ml)目录号:GF0203-01储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介及特点本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱,和独特的缓冲液系统,能高效、专一吸附 DNA,可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取细菌的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂,安全方便;提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。提取得率材料 提取量 DNA 得率细菌培养液 106 -108 cells 5-20ug注意事项1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。3.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取细菌培养液1-5 ml,10,000 rpm(~11,500×g)离心1 min,尽量吸净上清。2.向菌体沉淀中加入200 μl溶液GA,振荡至菌体彻底悬浮。注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第2步骤,加入溶菌酶溶液进行破壁处理,具体方法为:加入110 μl溶菌酶缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2%Triton),和70 μl溶菌酶溶液(50 mg/ml,客户自备,目录号:RT401),37 ℃处理30min以上。如果需要去除RNA,可加入4 μlRNase A(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:GF1202-01),振荡15 sec,室温放置5 min。3.向管中加入20μl Proteinase K溶液,混匀。4.加入200 μl溶液BG,振荡15 sec,70 ℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。5.加入 200ul 无水乙醇,充分振荡混匀 15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CG1 中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放回收集管中。7.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG,12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放入收集管中。注意:这一步骤对于清除内切酶是必不可少的,以防止污染。8.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放入收集管中。9.重复操作步骤 8。10.将吸附柱 CG1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。11.将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2-5 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min,将溶液收集到离心管中。注意:洗脱液体积不应少于 50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
血液/细胞/组织基因组 DNA 纯化试剂盒产品组成GF304-02GF304-03(50 preps)(200 preps)溶液 GA (Buffer GA)15 ml60 ml溶液 BG (Buffer BG)30ml120ml蛋白酶 K (20mg/ml)1.1ml4*1.1ml漂洗液 PW (Buffer PW)16ml(使用前请先加入64ml 无水乙醇)64ml(使用前请先加入256ml 无水乙醇)洗脱缓冲液 TB (Buffer TB)15 ml60 ml吸附柱 CG1 (Spin Columns CG1)50 个200 个收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml)50 个200 个选配试剂红细胞裂解液(Red Cell Lysis Buffer 货号:GF1201-01);RNase A (100mg/ml) 货号:GF0201-01) 储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预 热10 min,以溶解沉淀。 产品简介及特点本试剂盒采用可以特异性结合DNA 的离心吸附柱,和独特的缓冲液系统,能高效、专一吸附DNA,可有 效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取多种细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂,安全方便;提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。根据不同的样本量和样本类型,可以提取的DNA 产量范围为 1-40ug。 使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 注意事项 1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。 3. 所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料a. 如提取材料为血液,可直接使用 200μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足 200 μl 可加溶液GA 补足;注意:如需处理更大体积血液,如 300μl-1 ml,应按以下步骤操作:在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液 (例如,300μl 血液加入 900μl 红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放置 5 min,期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心 1 min(若离心机最高转速不允许,可 3000 rpm(~3,400×g)离心5 min),吸去上清,留下白细胞沉淀,加 200 μl 溶液 GA,振荡至彻底混匀。 红细胞裂解液本公司另外有售(货号:GF1201-01),可根据需要来决定购买。 b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量 5- 20μl,可加溶液 GA 补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤。c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后 10,000 rpm(~11,200×g)离心 1 min,倒尽上清,加 200 μl 溶液GA,振荡至彻底悬浮。d. 动物组织(脾组织用量应少 10 mg)应先打碎处理为细胞悬液,然后 10,000rpm(~11,200×g)离心 1 min,倒尽上清,加 200 μl 缓冲液 GA,振荡至彻底悬浮。注意:如果需要去除RNA,可加入 4 μl RNaseA(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:GF0201-01), 振荡 15 sec,室温放置 5 min。2. 加入 20μl Proteinase K 溶液,混匀。 a.提取血液基因组时,加入Proteinase K,混匀,即可继续进行下一步。 b.提取细胞基因组时,加入Proteinase K,混匀,即可继续进行下一步。 c.提取组织基因组时,加入 Proteinase K 混匀后,在 56℃放置,直至组织溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。注意:不同组织裂解时间不同,通常需 1-3 h 即可完成(鼠尾需要消化过夜),每小时颠倒混合样品 2-3次,用水浴振荡器也可。3. 加入 200ul 溶液 BG,充分颠倒混匀,70℃放置 10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入溶液 BG 时可能会产生白色沉淀,一般 70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不纯。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。4. 加入 200ul 无水乙醇,充分振荡混匀 15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1 中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱CG1 放回收集管中。 6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG,12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放入收集管中。注意:这一步骤对于清除内切酶是必不可少的,以防止污染。7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱CG1 放入收集管中。 8. 重复操作步骤 7。9. 将吸附柱CG1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR 等)实验。10. 将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液TB,室温放置 2-5 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min,将溶液收集到离心管中。注意:洗脱液体积不应少于 50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
血液/细胞/组织基因组 DNA 纯化试剂盒 产品组成 GF304-02 GF304-03 (50 preps) (200 preps) 溶液 GA (Buffer GA) 15 ml 60 ml 溶液 BG (Buffer BG) 30ml 120ml 蛋白酶 K (20mg/ml) 1.1ml 4*1.1ml 漂洗液 PW (Buffer PW) 16ml(使用前请先加入 64ml 无水乙醇) 64ml(使用前请先加入 256ml 无水乙醇) 洗脱缓冲液 TB (Buffer TB) 15 ml 60 ml 吸附柱 CG1 (Spin Columns CG1) 50 个 200 个 收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) 50 个 200 个 选配试剂红细胞裂解液(Red Cell Lysis Buffer 货号:GF1201-01);RNase A (100mg/ml) 货号:GF0201-01) 储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预 热10 min,以溶解沉淀。 产品简介及特点本试剂盒采用可以特异性结合DNA 的离心吸附柱,和独特的缓冲液系统,能高效、专一吸附DNA,可有 效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取多种细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂,安全方便;提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。根据不同的样本量和样本类型,可以提取的DNA 产量范围为 1-40ug。 使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 注意事项 1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。 3. 所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料a. 如提取材料为血液,可直接使用 200μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足 200 μl 可加溶液GA 补足;注意:如需处理更大体积血液,如 300μl-1 ml,应按以下步骤操作:在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液 (例如,300μl 血液加入 900μl 红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放置 5 min,期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心 1 min(若离心机最高转速不允许,可 3000 rpm(~3,400×g)离心5 min),吸去上清,留下白细胞沉淀,加 200 μl 溶液 GA,振荡至彻底混匀。 红细胞裂解液本公司另外有售(货号:GF1201-01),可根据需要来决定购买。 b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量 5- 20μl,可加溶液 GA 补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤。c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后 10,000 rpm(~11,200×g)离心 1 min,倒尽上清,加 200 μl 溶液GA,振荡至彻底悬浮。d. 动物组织(脾组织用量应少 10 mg)应先打碎处理为细胞悬液,然后 10,000rpm(~11,200×g)离心 1 min,倒尽上清,加 200 μl 缓冲液 GA,振荡至彻底悬浮。注意:如果需要去除RNA,可加入 4 μl RNaseA(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:GF0201-01), 振荡 15 sec,室温放置 5 min。2. 加入 20μl Proteinase K 溶液,混匀。 a.提取血液基因组时,加入Proteinase K,混匀,即可继续进行下一步。 b.提取细胞基因组时,加入Proteinase K,混匀,即可继续进行下一步。 c.提取组织基因组时,加入 Proteinase K 混匀后,在 56℃放置,直至组织溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。注意:不同组织裂解时间不同,通常需 1-3 h 即可完成(鼠尾需要消化过夜),每小时颠倒混合样品 2-3次,用水浴振荡器也可。3. 加入 200ul 溶液 BG,充分颠倒混匀,70℃放置 10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入溶液 BG 时可能会产生白色沉淀,一般 70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不纯。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。4. 加入 200ul 无水乙醇,充分振荡混匀 15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1 中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱CG1 放回收集管中。 6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG,12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放入收集管中。注意:这一步骤对于清除内切酶是必不可少的,以防止污染。7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱CG1 放入收集管中。 8. 重复操作步骤 7。9. 将吸附柱CG1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR 等)实验。10. 将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液TB,室温放置 2-5 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min,将溶液收集到离心管中。注意:洗脱液体积不应少于 50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介及特性本试剂盒采用独特的缓冲液体系和离心吸附柱,既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp-20 kb大小的DNA片段,又能用于直接纯化PCR产物,满足多种实验需要。整个纯化过程可在15分钟完成、不需进行苯酚萃取及酒精沉淀、纯化的DNA无盐类或大分子的污染。如果回收前DNA量为1-5ug,建议选用超薄DNA产物纯化试剂盒GF203或超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒DF208,推荐洗脱液体积20-50ul。a.使用相同的溶液,可进行三种不同的应用(PCR 产物纯化、DNA 产物纯化、胶体回收)。b.每一离心管柱可处理达 150ul 的 DNA 溶液或 PCR 反应产物,DNA 回收率可达 80%~95%。c.可用于以 TAE 或 TBE 缓冲液配制的琼脂糖凝胶的 DNA 回收,DNA 回收率可达 60~90%。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定:如回收前DNA只有1-5μg左右(推荐选用GF203或GF208超薄型试剂盒),加20-50μl洗脱液;如回收前有5-15μg左右DNA,加30-100μl洗脱缓冲液;如回收前有15-30μg左右DNA,加50-300μl洗脱缓冲液。5.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。6.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。一、从 PCR 反应液或酶切反应液中回收 DNA 1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。 2.加入 3 倍体积的溶液 PC 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。 3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.加入 700ul 的漂洗液至吸附柱中,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 5.重复操作步骤 4。 6.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验 7.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液 TB,室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。 二、从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段 1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。 2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PC,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。 注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。 3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.可选步骤:向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PC,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。 5.向吸附柱加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 6.重复操作步骤 5。 7.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验。 8.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱液 TB,静置 2 分钟,室温放置 2 min,12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介及特性本试剂盒采用独特的缓冲液体系和离心吸附柱,既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp-20 kb大小的DNA片段,又能用于直接纯化PCR产物,满足多种实验需要。整个纯化过程可在15分钟完成、不需进行苯酚萃取及酒精沉淀、纯化的DNA无盐类或大分子的污染。如果回收前DNA量为1-5ug,建议选用超薄DNA产物纯化试剂盒GF203或超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒DF208,推荐洗脱液体积20-50ul。a.使用相同的溶液,可进行三种不同的应用(PCR 产物纯化、DNA 产物纯化、胶体回收)。b.每一离心管柱可处理达 150ul 的 DNA 溶液或 PCR 反应产物,DNA 回收率可达 80%~95%。c.可用于以 TAE 或 TBE 缓冲液配制的琼脂糖凝胶的 DNA 回收,DNA 回收率可达 60~90%。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定:如回收前DNA只有1-5μg左右(推荐选用GF203或GF208超薄型试剂盒),加20-50μl洗脱液;如回收前有5-15μg左右DNA,加30-100μl洗脱缓冲液;如回收前有15-30μg左右DNA,加50-300μl洗脱缓冲液。5.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。6.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。一、从 PCR 反应液或酶切反应液中回收 DNA 1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。 2.加入 3 倍体积的溶液 PC 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。 3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.加入 700ul 的漂洗液至吸附柱中,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 5.重复操作步骤 4。 6.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验 7.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液 TB,室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。 二、从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段 1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。 2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PC,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。 注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。 3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。 4.可选步骤:向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PC,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。 5.向吸附柱加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。 6.重复操作步骤 5。 7.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验。 8.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱液 TB,静置 2 分钟,室温放置 2 min,12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收 DNA 片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收 100 bp-30 kb 大小的片段,回收率可达 80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的 DNA 量为 20 μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。产品特点快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度的目的DNA。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。5.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PN,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。3.将吸附柱 CB1 放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.可选步骤:向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PN,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。5.向吸附柱 CB1 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。6.重复操作步骤 5。7.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。8.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 50-300ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积不应小于 50 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp-30kb大小的片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。如果回收前 DNA 量为 1-5ug,建议选用 DF208 超薄琼脂糖凝胶回收 kit,推荐洗脱液体积 20-50ul。产品特点快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度的目的DNA。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。5.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PN,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。3.将吸附柱 CB2 放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.可选步骤:向吸附柱 CB2 加入 400ul 的溶液 PN,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。5.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。6.重复操作步骤 5。7.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。8.将吸附柱 CB2 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 30-100ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp-30kb大小的片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。如果回收前 DNA 量为 1-5ug,建议选用 DF208 超薄琼脂糖凝胶回收 kit,推荐洗脱液体积 20-50ul。产品特点快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度的目的DNA。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。5.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PN,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。3.将吸附柱 CB2 放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.可选步骤:向吸附柱 CB2 加入 400ul 的溶液 PN,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。5.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。6.重复操作步骤 5。7.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。8.将吸附柱 CB2 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 30-100ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-30kb DNA片段,回收率高达80%。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为5 μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。产品特点快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度的目的DNA。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。4.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。5.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PN,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。3.将吸附柱 CB3 放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB3 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.可选步骤:向吸附柱 CB3 中加入 400ul 的溶液 PN,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液, 将吸附柱 CB3 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。5.向吸附柱 CB3 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB3 放回收集管中。6.重复操作步骤 5。7.将吸附柱 CB3 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。8.将吸附柱 CB3 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 20-50 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积不应小于 20 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-20 kb DNA片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。产品特点快速:整个操作过程只需十几分钟,节省时间。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度目的DNA。注意事项1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择胶回收试剂盒。2.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。3.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签;所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。2.加入 3 倍体积的溶液 PB 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。3.将吸附柱 CB1 放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.向吸附柱 CB1 中加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB1 放回收集管中。5.重复操作步骤 4。6.将吸附柱 CB1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。7.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量 50-300ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积不应小于 50 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-20 kb DNA片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。如果回收前DNA量为1-5ug,建议选用GF203超薄DNA产物纯化kit,推荐洗脱液体积20-50ul。产品特点快速:整个操作过程只需十几分钟,节省时间。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度目的DNA。注意事项1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择胶回收试剂盒。2.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。3.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签;所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。2.加入 3 倍体积的溶液 PB 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。5.重复操作步骤 4。6.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。7.将吸附柱CB2置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加30-100洗脱缓冲液TB,室温放置2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积不应小于 30 μl。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-20 kb DNA片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。如果回收前DNA量为1-5ug,建议选用GF203超薄DNA产物纯化kit,推荐洗脱液体积20-50ul。产品特点快速:整个操作过程只需十几分钟,节省时间。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度目的DNA。注意事项1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择胶回收试剂盒。2.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。3.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签;所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。2.加入 3 倍体积的溶液 PB 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。5.重复操作步骤 4。6.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。7.将吸附柱CB2置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加30-100洗脱缓冲液TB,室温放置2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积不应小于 30 μl。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA溶液收集到离心管。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100 bp-10 kb DNA片段,回收率可达80%以上,可用最少20ul的洗脱液进行洗脱,每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为5 μg,特别适用于较少样品量的回收。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。产品特点快速:整个操作过程只需十几分钟,节省时间。多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度目的DNA。注意事项1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择胶回收试剂盒。2.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。3.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签;所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后,移取反应混合液(含有预纯化的 DNA)至干净的离心管。2.加入 3 倍体积的溶液 PB 至反应混合液中(如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液),震荡混合均匀。3.将吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的悬液,将吸附柱 CB3 放回收集管中。注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。4.向吸附柱 CB3 加入 700ul 的漂洗液 PW,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1分钟,丢弃悬液,将吸附柱 CB3 放回收集管中。5.重复操作步骤 4。6.将吸附柱 CB3 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。7.将吸附柱 CB3 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 20-50ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。注意:洗脱体积最低不应小于 20 μl,体积过少会影响回收的效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20℃,以防止 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,再次离心管。
储存条件第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。单独包装的RNaseA 在室温可稳定保存12个月。本试剂盒在室温 (15-25℃) 干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存时,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的去内毒素漂洗液和过滤器,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1h,方便快捷。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。推荐每次菌液使用量:高拷贝质粒推荐使用量为50 ml,得率一般在250-750 μg左右; 低拷贝质粒推荐使用量为100 ml,得率一般在100-300 μg左右。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液P1在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A全部加入),混匀,置于2-8℃保存。2.使用前先检查溶液P2、溶液P3是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出,避免滤膜因压力而松动。4.去内毒素溶液 ER 在多次开盖使用后,可能会有细微的颜色变化,不影响最终质粒提取效率和纯度。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、P3的用量;洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热(可以适当延长吸附和洗脱时间,以提高提取效率)。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取20-50 ml(根据培养菌体的浓度选择合适的量, 低拷贝推荐用100 ml) 过夜培养的菌液加入离心管,室温10,000 rpm(~11,500×g )离心3 min收集细菌,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中,菌液量以能够充分裂解为佳,菌液过多会导致裂解不充分从而降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入5 ml溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。对于低拷贝质粒,加大菌体用量的同时按比例增加P1、P2、P3的用量。3.向离心管中加入5 ml溶液P2,立即温和地上下翻转6-8次,室温放置4 min。(不要超过5min,)注意:温和地混匀,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏;此时菌液应变得清亮粘稠, 如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入5 ml溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,至溶液出现白色分散絮状沉淀。然后室温放置2-3 min左右。10,000 rpm(~11,500×g )离心10 min,使白色沉淀离至管底 (可适当增加离心时间) ,将全部溶液小心倒入过滤器CS2中 (请避免倒入大量沉淀而阻塞过滤器),慢慢推动推柄过滤,滤液收集在干净的15 ml的管中(自备) 。注意:加入溶液P3后应立即混匀,避免产生局部沉淀。如果离心后倒入过滤器CS2中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤。如果菌体过多 (>50 ml) ,推荐延长离心时间至20-30 min。5.转移 4 ml 上一步所得滤液至吸附柱 CP3 中(吸附柱放入 15 ml 收集管中),10,000 rpm(~11,500×g )离心 2 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CP3 重新放回收集管中。重复该步骤直至所有滤液全部通过吸附柱 CP3。6.向吸附柱CP3中加入3.5 ml去内毒素漂洗液ER,放置2分钟,10,000 rpm(~11,500×g )离心2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。7.向吸附柱CP3中加入3.5 ml漂洗液PW(请检查是否已加入无水乙醇),10,000 rpm(~11,500×g )2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。8.重复操作步骤7。9.接着10,000 rpm (~11,500×g) 离心5 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP3开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10.将吸附柱CP3置于一个干净的15 ml收集管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加0.5-1 ml洗脱缓冲液TB,室温放置2-3 min,然后室温10,000 rpm(~11,500×g )离心2 min。将15 ml离心管中的洗脱液全部移入一个干净的1.5 ml离心管,-20℃保存。注意:洗脱缓冲液用量的多少主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要的浓度来确定,洗脱缓冲液体积不应少于0.5ml,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.5-8.0 范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,10,000 rpm(~11,500×g ) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。单独包装的RNaseA 在室温可稳定保存12个月。本试剂盒在室温 (15-25℃) 干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存时,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的结合液和去内毒素漂洗液,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1h,方便快捷。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。推荐每次菌液使用量:高拷贝质粒推荐使用量为50 ml,得率一般在250-750 μg左右; 低拷贝质粒推荐使用量为100 ml,得率一般在100-300 μg左右。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液P1在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A全部加入),混匀,置于2-8℃保存。2.使用前先检查溶液P2、溶液E3是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.去内毒素溶液 ER 在多次开盖使用后,可能会有细微的颜色变化,不影响最终质粒提取效率和纯度。4.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、E3的用量;洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热(可以适当延长吸附和洗脱时间,以提高提取效率)。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取20-50 ml(根据培养菌体的浓度选择合适的量,低拷贝推荐用100 ml)过夜培养的菌液加入离心管,室温10,000 rpm(~11,500×g)离心3 min收集细菌,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌液量以能够充分裂解为佳,菌液过多会导致裂解不充分从而降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入5 ml溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。对于低拷贝质粒,加大菌体用量的同时按比例增加P1、P2、E3的用量。3.向离心管中加入5 ml溶液P2,立即温和地上下翻转6-8次,室温放置2~4 min。注意:温和地混匀,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间不应超过5 min,以免形成单股DNA而影响后续酶实验;此时菌液应变得清亮粘稠,如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入5 ml溶液E3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,10,000 rpm(~11,500×g)离心10 min。注意:加入溶液E3后应立即混匀,避免产生局部沉淀。如果菌体过多 ( >50 ml) ,推荐延长离心时间至20-30 min。5.将上一步收集的上清液小心移至另一新的50ml离心管(自备),加入10 ml异丙醇(需自备),上下翻转6-8次,充分混匀,10,000 rpm (~11,500×g)离心10 min ,保留管底的白色沉淀(DNA pellet),丢弃上清液。6.向离心管(底部有离心所得的白色沉淀)加入1 ml溶液BCE,用移液器吸吐使白色沉淀(DNA pellet)完全溶解。7.将上一步所得溶液(DNA 溶液)转移至吸附柱 CP3 中(吸附柱放入 15 ml 收集管中),放置 1 min ,10,000rpm (~11,500×g)离心 2 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CP3 放回收集管中。8.向吸附柱 CP3 中加入 2ml 溶液 BCE 溶液,放置 2 min ,10,000 rpm (~11,500×g)离心 2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱 CP3 放入收集管中。9.向吸附柱CP3中加入3.5 ml去内毒素漂洗液ER,放置2 min ,10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱CP3重新放回收集管中。10.向吸附柱CP3中加入3.5 ml漂洗液PW(请检查是否已加入无水乙醇),10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱CP3重新放回收集管中。11.重复操作步骤10 。12.接着10,000 rpm (~11,500×g)离心5 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP3开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。13.将吸附柱CP3置于一个干净的15 ml收集管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加0.5-1 ml洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,然后室温10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min ,将15 ml离心管中的洗脱液全部移入一个干净的1.5 ml离心管,-20℃保存。注意:洗脱缓冲液用量的多少主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要的浓度来确定,洗脱缓冲液体积不应少于0.5ml,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.5-8.0 范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以平衡溶液温度)。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。产品简介本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的去内毒素溶液ER和过滤柱CS1,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1个小时,方便快捷。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。4.去内毒素溶液 ER 在多次开盖使用后,可能会有细微的颜色变化,不影响最终质粒提取效率和纯度。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其它用途1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌体量以能够充分裂解为佳,过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1 (请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀,然后室温放置10 min左右,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心2min,小心地将过滤离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体,说明步骤4的上清中杂质过多,可以延长离心的时间;如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量地吸取上清)。6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。7.向吸附柱CP2加入750 ml 去内毒素溶液ER(已经加入异丙醇),静置2分钟使管柱膜平衡,室温12,000rpm (~13,400×g)离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。8.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。注意:加入漂洗液PW后,如果室温静置2-5 min,有助于更好地去除杂质。9.重复操作步骤8.10.将吸附柱CP2重新放回收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。11.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,可高效、专一吸附DNA,另外由于增加了过滤柱,可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。以下操作步骤适用于提取5-15ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNaseA(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有浑浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌体量以能够充分裂解为佳,过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心2min,小心地将过滤离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体,说明步骤4的上清中杂质过多,可以延长离心的时间;如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量地吸取上清)。6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。7.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。注意:加入漂洗液PW后,如果室温静置2-5 min,有助于更好地去除杂质。8.重复操作步骤7。9.将吸附柱CP2重新放回收集管中置于12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min, 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。