储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA,可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。收集的菌体量以能够充分裂解为佳,菌体过多裂解不充分会降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5min,以免质粒受到破坏。如果菌液没有变清亮,可能是由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中,其容量为750-800ul),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。6.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。7.重复操作步骤6。8.吸附柱CP2放入收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。9.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。由于增加了过滤柱,与普通的提取方法相比,本试剂盒可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g)。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min,小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱CP1中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体说明步骤4吸取的上清中杂质过多,可以延长离心的时间; 如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量的吸取上清)。6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。7.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。8.重复操作步骤7。9.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。10.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。低拷贝或大质粒( >10kb)提取如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1-5ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前请先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm(~13,400×g )。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时将出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心10 min。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP1中 (吸附柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。6.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。7.重复操作步骤6。8.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。9.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。低拷贝或大质粒( >10kb)提取如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同
储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。 产品简介 本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1-5ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。 2.使用前请先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄 清。 3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。 4.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm(~13,400×g )。 5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。 2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。 注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。 注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时 菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体 过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时将出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心10 min。 注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上 清。 5.将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP1中 (吸附柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 6.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 7.重复操作步骤6。 8.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去 除。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 9.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。 低拷贝或大质粒( >10kb)提取 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同
【包装规格】产品编号 产品名称 包装 ES-8715 SuperBlot Protein-free Rapid Blocking Buffer(5×) 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】常温运输,2-8°C保存12个月【产品特点】l快速高效:5~10 min快速完成封闭;只结合封闭转印膜而不结合蛋白,因此不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,与传统的脱脂奶粉和BSA封闭相比信噪比更高;l性能可靠:无蛋白配方,与抗体无交叉反应;l应用范围广:无磷酸化蛋白,无生物素,尤其适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统,包括Western Blot及Elisa检测;l增强抗体效果:使用本封闭液后,所需的最适抗体浓度低于常规使用浓度,可大大节省抗体使用量。【概述】本品专为快速高效封闭Western Blot转印膜及Elisa检测而设计,采用无蛋白配方,避免抗体与封闭剂的非特异结合,可最大程度地降低背景。同时,本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素,对磷酸化特异抗体及生物素检测也不会产生干扰。本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合,因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,大大提高了抗体检测灵敏度。实验表明本封闭剂对许多抗体都有不同程度的信号增强作用。然而这种信号增强作用因抗体而异,对某一特定抗体,并不一定具有确定的信号增强作用。【使用建议】1.完成转膜后,将转印膜放入到杂交孵育盒中,加入10~20 mL TBS/T 或PBS/T;2.往TBS/T或PBS/T中加入1/4体积的无蛋白快速封闭液,置于摇床轻轻摇动,室温封闭约10min(即 配即用); 注意:使用本品通常封闭5~15min均可;经多种抗体的测试封闭10min的效果显著优于常规的BSA 封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体,可以尝试将封闭时间延长为30~60 min。如有特殊需要也可4°C封闭过夜。3.封闭后的膜即可用于一抗孵育等后续实验。【注意事项】1.注意: 没有任何一种封闭剂能适合所有抗原和抗体检测系统。如出现本试剂不适合的抗体,请替换使用其它种类的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等;2.本品仅用于科研用途,不得用于临床或诊断相关研究;3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
【操作方法】1. 对于贴壁细胞(以下均以6孔板为例,其它培养皿或培养板请根据相应面积换算):a.将细胞培养于培养皿或培养板内,通常在铺板后1-2天内长到70-90%。b. 在转染前1-2小时,吸去细胞培养液,更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。c. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl,若有多种质粒请混匀),以质量体积比1:3加入转染试剂6~12μl(如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl)。d.混匀后,室温孵育3-5分钟。e. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM(若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640,具体根据转染细胞使用的培养基),充分混匀后静置10-15分钟。f.后均匀滴加到整个6孔板内(加入前吸出原培养板中500μl培养基),并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。g. 在转染后4-6小时左右换液,更换为2ml新鲜的完全培养液,继续培养。h.通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。2. 对于悬浮细胞:a. 离心收集悬浮细胞,用PBS洗涤一次。b. 按照上面的步骤c)、d)、e)制备DNA-转染试剂-optiMEM混合物。c. 每106个细胞的沉淀,用500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物重新悬浮,室温放置15-20分钟。d. 在一个6孔板孔内加入1.5ml完全培养液,然后加入来自上一步的细胞-500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物,混匀。e. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同,在4-6小时后离心收集细胞,用PBS洗一次,然后用2毫升完全培养 液重新悬浮细胞,继续培养。g. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。
功能与使用方法与life品牌的Trizol LS相似【保存条件】2-8℃长期保存【操作方法】I. 样本处理1. 组织样本处理:用匀浆器或其他类似设备匀化组织样本机械破坏装置,每 500μL 最多使用 50 mg 组织NewZOL LS。 对于 DNA 含量高的组织(例如脾脏),建议使用 25 mg 组织/ 500μL 试剂。2. 贴壁细胞样本处理:除去细胞培养基,通过向培养皿(直径 3.5 cm,10 cm2)中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通过反复吸移来确保完全裂解。(根据培养皿面积而不是细胞数计算试剂量。试剂量不足将导致分离的 RNA 受到 DNA 污染。残留的匀浆可以在-20 至-80°C 下保存至少一年,以备后用。)3. 悬浮细胞样本处理:沉淀细胞,并通过添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106个细胞至少加入 500μLNewZOL LS,移液器吹打数次裂解细胞。(添加 NewZOL LS 之前请勿洗涤细胞,细胞洗涤可能会导致 RNA降解。)4. 液体样本处理:每 200μL 液体样品中加入 500μL NewZOL LS 进行均质化和裂解。对于小于 200μL 的样品体积,请添加 500μLNewZOL LS 并加水至最终体积为 700μL。5. 富含脂质样本处理:如上所述均质化富含脂质的样品。将样品以 12,000×g 离心 5 分钟。 离心后,样品顶部会出现一层脂肪。用移液器吸头尖端刺穿上层,然后将上清液转移到新管中。II. RNA 提取1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 无 RNase 的水至裂解液中。剧烈摇动样品 15 秒钟。在室温下孵育 5 分钟。(对于包含 50 mg 组织/ 500μL NewZOL LS 的样品,建议在室温下孵育 15 分钟。)2. 在室温下以12,000×g离心样品15分钟。含有DNA,蛋白质和多糖的半固体沉淀物形成在试管底部。RNA仍溶解在上清液中。3. 将 500μL 上清液转移至新管中。 勿吸太干净防止污染,在 DNA /蛋白质沉淀上方保留一小部分上清液。(含有 DNA,蛋白质和多糖的沉淀物占匀浆-水混合物总量的约 10%。)4. 加入等体积异丙醇,上下颠倒混匀以沉淀 RNA,在室温下孵育样品 10 分钟。5. 将样品以 12,000×g 离心 10 分钟,除去并丢弃上清液。通常,在管的底部以白色沉淀的形式获得 RNA。对于脾脏样品,RNA 在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后,膜变得更可见。6. 加入 500μL 75% 乙醇(无 RNase 水配制)洗涤,轻弹管底使沉淀悬浮,上下颠倒混匀。对于较大的试管,按比例添加 75% 乙醇溶液。7. 将沉淀以 8,000×g 的速度离心 3 分钟。移液去除沉淀中的乙醇,重复乙醇洗涤步骤一次。静置 5-10 分钟待乙醇挥发,无需过份干燥成固体,干燥成固体的 RNA 沉淀不易溶解8. 将 RNA 沉淀溶于无 RNase 的水中,在室温下涡旋 3 分钟,以实现有效溶解。将得到的 RNA 进行检测或-65℃长期保存(若需更长时间保存请添加适量 RNA Chill(ES-8520))。【注意事项】1. RNA 酶污染注意事项:a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌,吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管b. 佩戴手套及口罩及护目镜:皮肤上常含有细菌和霉菌,可污染 RNA 制备,且同时是 RNA 酶来源,同时 New ZOL LS 对皮肤有一定毒性,建议佩戴手套及口罩及护目镜。c. 尽量于通风橱内提取:避免吸入提取过程中有毒物质。2. 安全性问题:a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性,可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适,应立即就医
TopPette Multi-channel •8道移液器适用于标准96孔板;• 管嘴推出器可同时推出多道吸嘴,高效省力;• 移液器下半部可360度旋转,方便移液;• 每道管嘴连件都有独立的活塞装置,维修保养便捷;• 特别的管嘴连件设计,易于观察吸嘴的密封状况。
产品规格:Each准确度:±5.00 to 1.0%Compatible Tips:Finntip:300, Flex 300颜色编码:橙色描述:Finnpipette F3 , 8-ch, 30-300µL通道数:8量程(公制):30-300µL增量:1µL精密度:2.0 to 0.3%
DNA分子量标准 (100-750 bp) DNA Marker (100-750 bp)产品简介:本产品为预混有1×上样缓冲液的即用型的稳定、清晰、精准的DNA分子量标准,由7条线状双链DNA条带组成,适用于对100-750bp的双链DNA分子大小的估算和粗略定量。条带组成:750bp(15ng/ul)、600 bp(12ng/ul)、500 bp(10ng/ul)、400 bp(8ng/ul)、300 bp(6ng/ul)、200 bp(8ng/ul)、100 bp(10ng/ul)。储存液成分:10 mM TrisCl (pH 8.4),10 mM EDTA,0.02%溴酚兰,5%甘油使用说明:1. 建议用于1.0~2.0%的琼脂糖凝胶电泳,不推荐用于聚丙烯酰胺凝胶电泳;2. 电泳缓冲液可选用1xTAE 或0.5~1xTBE,电压6~8v/cm胶长,电泳时间30~60分钟;3. 根据上样孔宽度,用灭菌枪头吸取5~10ul本产品,加入上样孔中;4. 加入待检测DNA 样品后开始电泳;5. 电泳结束后,使用溴化乙啶(EB)或其它DNA 染料染色并观察电泳条带。注意事项:1. 经检测,本品室温放置三个月带型无变化;但建议低温保存,以防因操作不慎导致核酸酶污染而引起条带降解;2. 使用前请勿加热;3. 当电泳缓冲液缓冲能力下降时应及时更换电泳缓冲液,以免影响分辨效果。