Cell Store 无血清细胞冻存液(无 DMSO)【保存条件】 2-8°C 保存 12 个月,-20°C 保存 36 个月 【概述】 Cell Store 系列细胞冻存液可稳定长期储存细胞。凭借其独特的配方,可在冻融程序后实现稳定的冷冻保存和高存活率,是存储任何细胞类型(包括敏感细胞系)的值得信赖的解决方案。 本品可以用于常规细胞/肿瘤细胞/干细胞等细胞冻存,-80℃可长期保存(>5 年),细胞存活率在 90-98%,无需程序降温。【产品特点】 无 DMSO 即用型细胞冻存液 直接冻存于-80℃冰箱,长期保存(>5 年),无需程序性降温 无血清及其它蛋白质成份 细胞存活率高于传统 DMSO 血清方法 【使用建议(仅供参考)】 细胞冻存步骤 1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。 2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。3. 通过离心(3-5 分钟,1,000~2,000rpm)收集培养细胞沉淀,彻底去除离心管中上清液。 4. 加入适量 CellStore 无血清细胞冻存液于离心管中(每 1 ml 冻存液可用于 5×105-1×107细胞),轻柔混匀细胞制成细胞混合液。 5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管 1ml 或 1.5ml,标识细胞系名称、细胞浓度、传代日期和其他重要信息。 6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中,可长期冷冻保存。 7. 若需转移至液氮中长期保存,需先放入-80℃冻存至少 24 小时后方可移至液氮罐中保存。重要提示:最佳方案可能会随细胞类型而变化。冻存细胞复苏步骤 1. 从冰箱或液氮中取出冻存的细胞,立即置于 37℃水浴中快速解冻。 2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入 1ml 细胞培养基于冷冻管中与细胞混合,再将其中的混合液移至含有约 5ml 该细胞培养基的离心管中,1,000~2,000rpm 离心 3-5 分钟收集细胞沉淀,移弃上清液(操作时小心,切勿将细胞沉淀移去) 3. 使用适当体积的完全细胞培养基轻轻悬浮细胞,后转入至细胞培养平板或培养瓶。 4. 使用显微镜观察后,可根据各自研究所需的方案继续进一步的培养。【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途,不得用于临床或诊断相关研究 2. 对于敏感型复杂细胞系,建议在使用前对所冻存的胞进行至少为期 1 周的该产品试验性细胞冷冻保存培养,确认性能后再进行正式冻存 3. 请注意冻存过程中的无菌操作。
【保存条件】4℃保存一年【特点】 更低背景,减少非特异性结合 提升抗体稳定性,增强免疫反应强度 通用多种应用场景,可用于IF, IHC, ELISA, WB等实验中抗体稀释(一抗或二抗稀释)【使用建议(仅供参考)】1. 参考待稀释抗体说明书,并结合实际免疫检测实验的稀释建议,直接用本产品按照适当比例稀释一抗或二抗。2. 抗体孵育结束后稀释的抗体应立即存放在4℃,以便于后续重复使用。
溴化乙锭溶液(10000*) Ethidium Bromide Solution 5ml
Improved Citrate Antigen Retrieval Solution,50×【保存条件】4℃保存,一年有效【概述】1. 柠檬酸钠抗原修复液(Citrate Antigen Retrieval Solution)是一种最常用的抗原修复液,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。2. 细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致蛋白之间的交联(cross-link),从而遮蔽样品的抗原位点,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果。本抗原修复液对柠檬酸钠缓冲液(pH6.0)经过改进,可以更有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。【操作方法】1. 对于石蜡切片:2. a. 脱蜡:切片在二甲苯中脱蜡 5 分钟,再换用新鲜的二甲苯脱蜡,共用二甲苯脱蜡 3 次。无水乙醇 5分钟,两次。90%乙醇 5 分钟,两次,70%乙醇 5 分钟,一次。蒸馏水 5 分钟,两次。3. b. 抗原修复:用重蒸水或 Milli-Q 水将本抗原修复液(50×)稀释 50 倍,配制成抗原修复液(1×),例如1ml 本抗原修复液(50X)加入 49ml 重蒸水或 Milli-Q 水,混合均匀,即得 50ml 抗原修复液(1×)。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中,95-100℃加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30 分钟内,最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到 95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅,也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热,需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次,每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。4. 对于冰冻切片:5. 用免疫染色洗涤液洗涤切片 5 分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中,95-100℃加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30 分钟内,最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到 95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅,也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热,需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次,每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。6. 对于其它样品的抗原修复:可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。3. 本产品含有少量的特殊去垢剂,抗原修复过程中加热时会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状,属于正常现象,请放心使用。
【保存条件】室温保存,有效期1年。【概述】10×SuperBlot SDS-PAGE 快速蛋白电泳缓冲液是经典Laemmli电泳缓冲液的改良版,可显著提高分离速度,且不会产生过多的热量影响凝胶品质。10×SuperBlot SDS-PAGE 快速蛋白电泳缓冲液是Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液的直接替代品。可兼容各种Tris-甘氨酸或 Laemmli系统的商业预制或手铸凝胶。【使用建议】1. 取100ml 10×SuperBlot SDS-PAGE 快速蛋白电泳缓冲液加入约900ml蒸馏水或去离子水定容至1L(10倍稀释),混匀后即可使用。2. 在正常条件下,该电泳缓冲液支持50-250V电压下运行。在200-250V电压下运行,可在18-35分钟内完成电泳,具体电泳时间请根据指示带所在位置自行判断。3. 与使用标准Tris-甘氨酸缓冲液运行的凝胶相比,SuperBlot SDS-PAGE 快速蛋白电泳的最佳蛋白条带大小范围可能略有变化,具体见下表:表1. 不同胶浓度下电泳最佳蛋白条带大小范围胶浓度 标准Tris-甘氨酸电泳最佳蛋白大小范围 SuperBlot SDS-PAGE 快速电泳最佳蛋白大小范围 7.5% 50-325 kDa 20-250 kDa 10% 30-180 kDa 15-140 kDa 12% 20-140 kDa 10-80 kDa 15% 12-100 kDa 5-70 kDa 【注意事项】1. 本产品为高倍浓缩液,环境温度较低时可能会有结晶析出,可加热助溶,待溶解完全后再进行稀释使用;密封保存,防止污染。2. 调整电泳缓冲液浓度可更快获取结果。3. 该溶液含有SDS,专为变性凝胶电泳设计,不可用于非变性凝胶电泳。4. 为获得最佳实验结果,电泳槽内务必添加足够多的电泳缓冲液,并留意电泳指示带位置。5. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit 【贮藏与有效期】 -20℃以下保存,有效期为 12 个月。【主要成分与含量】 【用法与判定】1. 核酸提取步骤:取拭子或血样10μl 加入裂解液 10μl 充分混匀后于室温或 56℃处理10min后再 95℃加热 5min。取 5μl 上清用于下游检测扩增。为获取更优结果,可考虑使用柱法或磁珠法提取试剂盒提取核酸。2. PCR 操作步骤2.1 取出试剂盒,将试剂盒置室温(冰上溶解更优)各试剂完全溶解并混匀。2.2 取需要数量的 PCR 管,取 20μl PCR 反应液至每个反应管内,然后加 5μl 所提取的样品核酸,每个反应总体积为 25μl。每次检测应设立阳性对照和阴性对照,在荧光定量 PCR仪上进行扩增检测。2.3 将各 PCR 管放置在仪器槽的相应位置,并记录放置顺序,按下表设置仪器核酸扩增相关参数,进行 PCR 扩增。3.结果判定 3.1 阴性对照:1) FAM 与 VIC 通道均应无扩增曲线,偶有翘尾(Ct≥38)属于正常;3.2 阳性对照:1)FAM 通道应有扩增曲线,且其 Ct 值<33;FAM 通道 Ct 值≥33 时,检测试剂或者阳性参考品可能存在问题,应重新实验,此时若样本孔根据判读标准为阳性,结果为阳性;2)VIC 通道应有扩增曲线且其 Ct 值<32;VIC 通道 Ct 值≥32 时,检测试剂或者阳性参考品存在问题,应重新实验,此时若样本孔根据判读标准为阳性,结果为阳性;3.3 样本:1)VIC 通道 Ct 值>36:如 FAM 通到 Ct 值≤38,则结果为阳性;如 FAM 通到 Ct>38 或者没有扩增曲线,则样本投入量过少或者存在 PCR 抑制剂,建议重新取样;2)VIC 通道 Ct 值≤36:如 FAM 通到 Ct 值≤38,则结果为阳性;如 FAM 通到 Ct>38 或者没有扩增曲线,则结果为阴性。若被检样品 FAM 通道 38*注:VIC 通道为猪内参信号,FAM 为非瘟病毒信号。阳性结果应该是明细扩增曲线,如果应该增幅低且扩增曲线不明显,应为非特异性扩增。【注意事项】 (1)严格按照使用说明书进行操作。使用前应将各试剂完全溶化,充分振荡混匀,瞬时离心应尽量吸取液体上层。(2)试剂盒不同组分间不得交叉,防止污染。(3)避免反复冻融。(4)PCR 产物均应合理处理,以免造成污染。
Cell Counting Kit-8 【保存条件】 4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8 试剂盒简称 CCK-8 试剂盒,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法(仅供参考)】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入 100μl 2×103个细胞,细胞毒性实验每孔加入 100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定,推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要,进行培养并给予 0-10μl 特定的药物刺激。 2. 每孔加入 10μl CCK-8 溶液(如果起始的培养体积为 200μl,则需加入 20μl CCK-8 溶液,其它情况以此类推)。可以用加了相应体积细胞培养液和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内(37°C)继续孵育 0.5-4 小时,对于大多数情况孵育 1 小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在 0.5、1、2 和 4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在 450nm 测定吸光度。可以使用吸光度在 430-490nm 之间的滤光片,但是 450 nm 滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As:实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac:对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab:空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择 3-5 个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用 96 孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的 PBS、水或培养液;另一方面,可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响 CCK- 8 的测定,增加 OD 值;在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生,减小 OD 值;在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时,如果药物具有还原性,就会和 CCK- 8 试剂发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入 CCK- 8,测定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加 CCK-8) 的吸光度高,则证明药物有影响,可在加 CCK- 8 之前更换培养基,去掉药物的影响。 5. 如果测定的 OD 值太低可适当增加细胞数量或延长加入 CCK-8 溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
BCA Protein Assay Kit【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓 度下限达到 25µg/ml,最小检测蛋白量达到 0.5µg,待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保 EDTA 低于 10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依据样品数量,将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液,并充分混匀。 注:配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值(多孔则为平均 OD)为纵坐标c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度 x=0.37mg/ml)【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶,可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。
ECL Western Blotting Substrate【保存条件】 4℃避光保存 12 月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物 系统,SuperStar ECL 超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂(具有极高灵 敏度和高信噪比);可在日光灯下进行发光操作;发光迅速,荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000), 极其节省抗体。 【特点】 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或 PVDF 膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的 4 小时时间内提供稳定的信号持续时间,在最佳条 件下可产生长达 24 小时的光输出 稳定的试剂 - 8 小时工作溶液稳定性; 在 4℃下 1 年的试剂盒稳定性 更经济的抗体用量: 0.2 至 1.0μg/ mL 一抗(从 1 mg / mL 原液中 1:1000 至 1:5000 稀释) 10 至 50 ng / mL 二级抗体(从 1 mg / mL 原液中 1:20,000 至 1:100,000 稀释) 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链 亲和素-生物素-HRP 夹法。2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取 A:B=1:1 混合(如需要 1ml 发光液则取 500ul ECL A 液和 500ul ECL B 液混合),放入干净容器中混合。建议立即使用 工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液 (0.125ml 发光工作液/cm2 膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育 2 分钟,准备立即压片 曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促 反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。 为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开 X 光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将 Western Blot 膜贴在 保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹 Western Blot 膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余 的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 Western Blot 膜的保鲜膜固定在暗 盒内,蛋白带面向上。 6. 暗房内压 X 光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1~5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移 到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带 模糊。3. 发光工作液孵育约 2 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋 白条带 发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发 光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光,因而弱带可曝光 1-10 小 时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发光和 曝光。4. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000~1:4000, 二抗 1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带 的位置和大小。7. NaN3能抑制 HRP 活性,回收第二抗体应避免使用 NaN3,如必需使用勿超过 0.01%。
细胞培养真菌抗生素(100×) (三抗 青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液) 100ml
功能与使用方法与life品牌的Trizol LS相似 【保存条件】2-8℃长期保存【操作方法】I. 样本处理1. 组织样本处理:用匀浆器或其他类似设备匀化组织样本机械破坏装置,每 500μL 最多使用 50 mg 组织NewZOL LS。 对于 DNA 含量高的组织(例如脾脏),建议使用 25 mg 组织/ 500μL 试剂。 2. 贴壁细胞样本处理:除去细胞培养基,通过向培养皿(直径 3.5 cm,10 cm2)中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通过反复吸移来确保完全裂解。(根据培养皿面积而不是细胞数计算试剂量。试剂量不足将导致分离的 RNA 受到 DNA 污染。残留的匀浆可以在-20 至-80°C 下保存至少一年,以备后用。) 3. 悬浮细胞样本处理:沉淀细胞,并通过添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106个细胞至少加入 500μLNewZOL LS,移液器吹打数次裂解细胞。(添加 NewZOL LS 之前请勿洗涤细胞,细胞洗涤可能会导致 RNA降解。) 4. 液体样本处理:每 200μL 液体样品中加入 500μL NewZOL LS 进行均质化和裂解。对于小于 200μL 的样品体积,请添加 500μLNewZOL LS 并加水至最终体积为 700μL。 5. 富含脂质样本处理:如上所述均质化富含脂质的样品。将样品以 12,000×g 离心 5 分钟。 离心后,样品顶部会出现一层脂肪。用移液器吸头尖端刺穿上层,然后将上清液转移到新管中。 II. RNA 提取1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 无 RNase 的水至裂解液中。剧烈摇动样品 15 秒钟。在室温下孵育 5 分钟。(对于包含 50 mg 组织/ 500μL NewZOL LS 的样品,建议在室温下孵育 15 分钟。) 2. 在室温下以12,000×g离心样品15分钟。含有DNA,蛋白质和多糖的半固体沉淀物形成在试管底部。RNA仍溶解在上清液中。 3. 将 500μL 上清液转移至新管中。 勿吸太干净防止污染,在 DNA /蛋白质沉淀上方保留一小部分上清液。(含有 DNA,蛋白质和多糖的沉淀物占匀浆-水混合物总量的约 10%。)4. 加入等体积异丙醇,上下颠倒混匀以沉淀 RNA,在室温下孵育样品 10 分钟。5. 将样品以 12,000×g 离心 10 分钟,除去并丢弃上清液。通常,在管的底部以白色沉淀的形式获得 RNA。对于脾脏样品,RNA 在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后,膜变得更可见。 6. 加入 500μL 75% 乙醇(无 RNase 水配制)洗涤,轻弹管底使沉淀悬浮,上下颠倒混匀。对于较大的试管,按比例添加 75% 乙醇溶液。 7. 将沉淀以 8,000×g 的速度离心 3 分钟。移液去除沉淀中的乙醇,重复乙醇洗涤步骤一次。静置 5-10 分钟待乙醇挥发,无需过份干燥成固体,干燥成固体的 RNA 沉淀不易溶解 8. 将 RNA 沉淀溶于无 RNase 的水中,在室温下涡旋 3 分钟,以实现有效溶解。将得到的 RNA 进行检测或-65℃长期保存(若需更长时间保存请添加适量 RNA Chill(ES-8520))。 【注意事项】1. RNA 酶污染注意事项:a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌,吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管 b. 佩戴手套及口罩及护目镜:皮肤上常含有细菌和霉菌,可污染 RNA 制备,且同时是 RNA 酶来源,同时 New ZOL LS 对皮肤有一定毒性,建议佩戴手套及口罩及护目镜。 c. 尽量于通风橱内提取:避免吸入提取过程中有毒物质。2. 安全性问题:a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性,可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适,应立即就医
功能与使用方法与life品牌的Trizol LS相似 【保存条件】2-8℃长期保存【操作方法】I. 样本处理1. 组织样本处理:用匀浆器或其他类似设备匀化组织样本机械破坏装置,每 500μL 最多使用 50 mg 组织NewZOL LS。 对于 DNA 含量高的组织(例如脾脏),建议使用 25 mg 组织/ 500μL 试剂。 2. 贴壁细胞样本处理:除去细胞培养基,通过向培养皿(直径 3.5 cm,10 cm2)中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通过反复吸移来确保完全裂解。(根据培养皿面积而不是细胞数计算试剂量。试剂量不足将导致分离的 RNA 受到 DNA 污染。残留的匀浆可以在-20 至-80°C 下保存至少一年,以备后用。) 3. 悬浮细胞样本处理:沉淀细胞,并通过添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106个细胞至少加入 500μLNewZOL LS,移液器吹打数次裂解细胞。(添加 NewZOL LS 之前请勿洗涤细胞,细胞洗涤可能会导致 RNA降解。) 4. 液体样本处理:每 200μL 液体样品中加入 500μL NewZOL LS 进行均质化和裂解。对于小于 200μL 的样品体积,请添加 500μLNewZOL LS 并加水至最终体积为 700μL。 5. 富含脂质样本处理:如上所述均质化富含脂质的样品。将样品以 12,000×g 离心 5 分钟。 离心后,样品顶部会出现一层脂肪。用移液器吸头尖端刺穿上层,然后将上清液转移到新管中。 II. RNA 提取1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 无 RNase 的水至裂解液中。剧烈摇动样品 15 秒钟。在室温下孵育 5 分钟。(对于包含 50 mg 组织/ 500μL NewZOL LS 的样品,建议在室温下孵育 15 分钟。) 2. 在室温下以12,000×g离心样品15分钟。含有DNA,蛋白质和多糖的半固体沉淀物形成在试管底部。RNA仍溶解在上清液中。 3. 将 500μL 上清液转移至新管中。 勿吸太干净防止污染,在 DNA /蛋白质沉淀上方保留一小部分上清液。(含有 DNA,蛋白质和多糖的沉淀物占匀浆-水混合物总量的约 10%。)4. 加入等体积异丙醇,上下颠倒混匀以沉淀 RNA,在室温下孵育样品 10 分钟。5. 将样品以 12,000×g 离心 10 分钟,除去并丢弃上清液。通常,在管的底部以白色沉淀的形式获得 RNA。对于脾脏样品,RNA 在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后,膜变得更可见。 6. 加入 500μL 75% 乙醇(无 RNase 水配制)洗涤,轻弹管底使沉淀悬浮,上下颠倒混匀。对于较大的试管,按比例添加 75% 乙醇溶液。 7. 将沉淀以 8,000×g 的速度离心 3 分钟。移液去除沉淀中的乙醇,重复乙醇洗涤步骤一次。静置 5-10 分钟待乙醇挥发,无需过份干燥成固体,干燥成固体的 RNA 沉淀不易溶解 8. 将 RNA 沉淀溶于无 RNase 的水中,在室温下涡旋 3 分钟,以实现有效溶解。将得到的 RNA 进行检测或-65℃长期保存(若需更长时间保存请添加适量 RNA Chill(ES-8520))。 【注意事项】1. RNA 酶污染注意事项:a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌,吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管 b. 佩戴手套及口罩及护目镜:皮肤上常含有细菌和霉菌,可污染 RNA 制备,且同时是 RNA 酶来源,同时 New ZOL LS 对皮肤有一定毒性,建议佩戴手套及口罩及护目镜。 c. 尽量于通风橱内提取:避免吸入提取过程中有毒物质。2. 安全性问题:a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性,可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适,应立即就医