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电镜固定液（2％中性戊二醛－2％多聚甲醛混合）
基本售价：260.00元
EM Fixative Solution【保存条件】 4℃避光保存，有效期 6 个月。 【概述】 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和 细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。电镜固定液(2％中性戊二醛-2％多聚甲醛混合)由戊二醛、多聚甲醛、磷酸盐等组成，pH7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本的固定。 【使用说明（仅供参考）】 1. 根据实验具体要求获取新鲜标本。 2. 加入电镜固定液于 4℃固定 1～4h，稍大标本应适当延长固定时间。 3. 送检或 4℃保存。 【注意事项】 1. 电镜固定液有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作， 避免吸入。 2. 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为 2～4mm，一般不超过 6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 3. 固定液的使用应足量，一般固定液与组织块的体积比率应大于 10：1。如果固定液的使用量不够大，可以在固定期间更换 1～3 次固定液。 4. 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。 5. 为保证实验效果，取出新鲜组织后应及时固定。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
寡核苷酸退火缓冲液Annealing buffer, 1ml*5
基本售价：460.00元
Annealing buffer, 10×【保存条件】 -20 ℃保存，有效期 12 个月 【概述】 本品适用于小片段（5-500bp）单链 DNA 的杂交反应，获得更优质的杂交双链 DNA 片段，如 shRNA、 gRNA载体等构建。 【操作方法】 I．体系配制（如下 20 µl 体系为例） II. 退火条件 A. 水浴锅或 Heat Block 1．在微管中混合等体积的等摩尔寡核苷酸。 2．将微管在 95°C 下孵育 5 分钟。 3．让微管缓慢冷却至室温(注：若水浴等水温升至最高后加入，勿中途取出)。 B. PCR（热循环）仪(可选择简易步骤或进阶步骤的其中一种使用) 【注意事项】1. 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，以免污染。2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
寡核苷酸退火缓冲液Annealing buffer, 10×
基本售价：210.00元
Annealing buffer, 10× 【保存条件】 -20 ℃保存，有效期 12 个月 【概述】 本品适用于小片段（5-500bp）单链 DNA 的杂交反应，获得更优质的杂交双链 DNA 片段，如 shRNA、 gRNA载体等构建。 【操作方法】 I．体系配制（如下 20 µl 体系为例） II. 退火条件 A. 水浴锅或 Heat Block 1．在微管中混合等体积的等摩尔寡核苷酸。 2．将微管在 95°C 下孵育 5 分钟。 3．让微管缓慢冷却至室温(注：若水浴等水温升至最高后加入，勿中途取出)。 B. PCR（热循环）仪(可选择简易步骤或进阶步骤的其中一种使用) 【注意事项】1. 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，以免污染。2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
潮霉素B 50mg / ml (无菌)-5ml
基本售价：430.00元
Hygromycin B solution 50mg/ml 5ml 【保存条件】 4℃保存，一年有效 【概述】 潮霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素，可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌，真菌和高级真核生物。潮霉素 B 最初是作为抗蠕虫药开发的，在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。 【操作方法】 1. 常用筛选浓度 注意：潮霉素 B 用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化， 推荐使用浓度为 50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（ kill curve），即剂量 反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。 一般而言，哺乳动物细胞 50-500μg/mL；细菌/植物细胞 20-200μg/mL；真菌 300-1000μg/mL。 2. 杀灭曲线的建立 注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度， 可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择 5 个浓度。 1）第一天：未转化的细胞按照 20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2 培养过夜；注：对于 需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。 2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定 50，100，250，500，750， 1000μg/mL。先用去离子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例将母液稀释到 5 mg/ml，然后按照下表稀释到相 应浓度的工作液。 3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4）接下来每 3-4 天更换新的含药物培养基。 5）按照固定的周期（如每 2 天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天 数（通常是 7-10 天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。3. 稳定转染细胞的筛选 1）转染 48h 后，用含有适当浓度的潮霉素 B 筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。 注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较 好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过 25%。 2）每隔 3-4 天更换含有药物的筛选培养液。 3）筛选 7 天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这 取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。 4）挑取并转移 5-10 个抗性克隆于 35mm 细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养 7 天。 5）之后更换正常培养基培养即可。 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
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